[发明专利]预防龋齿的疫苗试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及口腔医学预防技术领域，特别涉及一种预防龋齿的疫苗试剂盒和使用该疫苗试剂盒的方法。

背景技术

目前，龋病仍是威胁人类口腔健康的全球性问题，寻求一种简便、经济、有效的防龋方法是众多龋病研究者追求的目标。免疫防龋研究已有40年的历史，积累了大量的理论与实践成果，并且还在不断发展。

上世纪60年代，大量流行病学和病因学研究显示，变形链球菌是人类主要的致龋微生物，它在口腔中的定植与龋病的发生密切相关。1965年，Thomas及其同事报道IgA系统是唾液中首要的特异性免疫成分。经过几十年的大量研究，一些重要的发现为免疫防龋奠定了理论基础。第一，变形链球菌和茸毛链球菌被公认为是主要的致龋菌，它们能够黏附于牙面，具有产酸和耐酸的致龋特性。变形链球菌的表面蛋白抗原Ag I/II(PAc，P1)、茸毛链球菌的细胞表面蛋白抗原SpaA(PAg)、它们的葡糖基转移酶(glucosyltransferase，GTF)和葡聚糖结合蛋白(Gbp)参与细菌在牙面的定植过程，是重要的毒力因子。目前，防龋疫苗的候选抗原多集中在这几个蛋白。第二，随着对黏膜免疫系统研究的深入，目前已明确唾液中的分泌性IgA(S-IgA)抗体对防龋起主要作用。通过黏膜免疫刺激共同黏膜免疫系统，诱导唾液S-IgA抗体是更为有效的免疫防龋途径，更容易被接受也更安全。唾液S-IgA抗体对抗致龋菌的机制包括干扰细菌对牙面的蔗糖非依赖性和蔗糖依赖性黏附，干扰细菌在牙面的聚集以及可能抑制细菌的代谢活动。此外，血清抗体、牙龈内抗体、补体和粒细胞不断地从龈沟渗出到口腔，这些成分也可能对牙颈部产生适度的保护作用，但对牙冠部分无明显作用。

DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗，其基本原理是将外源性基因直接导入宿主细胞内，诱导宿主免疫系统对目的基因所表达的蛋白发生免疫反应，达到预防疾病的目的。DNA疫苗具有免疫原性强、可激发全面持久的免疫应答、可制备成多价疫苗、制备简单等优点。但是，我们要看到目前为止DNA免疫所得到的结果还很不均一，有的DNA疫苗能起到很好的保护作用，有的却保护不明显，甚至还有免疫自然宿主反而加重了病毒感染的报道。目前DNA免疫尚处于探索时期，所用的动物、表达载体、基因片段等均不相同，结果差别甚大。

免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型的物质。分子生物学技术的发展，促进了基因重组疫苗和多肽疫苗的研究。这些疫苗如果用佐剂辅助其刺激机体产生强的免疫应答，将使机体更好的获得对病原体的保护免疫。目前在动物实验中使用最广泛的Freund不完全佐剂和完全佐剂，是一类强有力的TH1细胞活化剂，能诱导有效的细胞和体液免疫，但由于其严重的副作用，不能应用于人类。目前广泛应用于人类的佐剂只有铝盐和角鲨烷油/水乳化剂(M F59)，主要是增强体液免疫，但不能诱导强的CTL免疫应答，而后者对抗某些病毒(如H IV等)和一些肿瘤(如淋巴瘤EL4等)尤为重要。

因此，需要发明一种新的预防龋齿的疫苗以解决上述问题。

发明内容

本发明的主要目的之一在于基于现有技术的不足而提供一种免疫原性强、可激发全面持久的免疫应答，而且特异性强、免疫效果均一的预防龋齿的疫苗试剂盒。

本发明的另一个目的是提供一种免疫效果优良、操作简便的预防龋齿的疫苗试剂盒的使用方法。

本发明提供一种预防龋齿的疫苗试剂盒，所述的预防龋齿的疫苗试剂盒包括抗原和佐剂，所述抗原是共表达龋齿变形链球菌的至少一种表面蛋白抗原和至少一种龋齿变形链球菌的葡糖基转移酶的重组质粒，所述佐剂为一种或者一种以上细菌的鞭毛蛋白。

作为本发明优选实施方式，预防龋齿的疫苗试剂盒所述抗原是共表达龋齿变形链球菌的表面蛋白抗原PAc和龋齿变形链球菌的葡糖基转移酶GTF的重组质粒，所述佐剂为沙门氏杆菌鞭毛蛋白。

作为本发明优选实施方式，预防龋齿的疫苗试剂盒所述的重组质粒的质粒载体为pVAX、pcDNA3.0或pcDNA3.1。预防龋齿的疫苗试剂盒所述的重组质粒的质粒载体最优选为pVAX。