[发明专利]用于沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌复合增菌的培养基及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及一种同时对沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌复合增菌的培养基。

背景技术

我国是水产品出口大国，但是随着贸易全球化，我国渔业将面临前所未有的新问题和新挑战，对我国水产品质量提出了更高的要求，无污染、无公害必将成为水产品进入国际市场的入场券食品中污染的病原细菌是引起食源性疾病的主要因素之一，是一项巨大并不断扩大的世界性公共卫生问题，控制微生物污染是目前解决水产品污染问题的主要内容。

沙门氏菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌都是水产品中常见致病菌，是进出口水产品中的常检项目。随着人们生活方式的改变以及水环境的恶化，越来越多人由于进食未煮熟的水产品而受到感染，加上这三种细菌危害巨大，特别是霍乱弧菌可引起大流行，严重威胁人民的生命健康，出口水产品污染这三种菌，阻碍我国水产品的出口，影响我国经济和我国在国际上的声誉，所以对水产品进行沙门氏菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌的监测势在必行，对于保证人民生命健康，我国经济健康发展具有重大的意义。

目前对沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌主要采用常规增菌培养、生化鉴定及自动酶联荧光免疫检测方法(VIDAS)相结合，大多要耗费4-6天时间，而且程序复杂，所用试剂繁多，费时费力，检出效率低，检测灵敏度低，假阴性比较严重。近年来，酶联荧光免疫检测法(VIDAS)、聚合酶链式反应(PCR)、金标试纸法、API法、聚合酶免疫检测方法(EIA)和DNA探针技术等新技术逐渐应用于微生物检测，大大提高检测的灵敏度和简化了操作，甚至出现多重PCR技术、蛋白或抗体微阵列感受器、免疫吸收及DNA微阵列等技术等同一检测平台上检测多种微生物的检测方法，但是所有这些方法仍然离不开选择性增菌和/或前增菌。现有的增菌方法主要是根据所要监测的菌株进行各自的增菌处理，即不同的菌株采用各自的选择性增菌培养基进行增菌处理，费时费力，不符合现代检测方法一平台同时检测多种致病菌的发展趋势。

国际上研究出一种通用增菌培养基(UPB)可以同时增殖多种细菌，但是由于该培养基没有选择性，除了要监测的目标菌能增殖外，其它杂菌也可以大量生长，杂菌的大量生长必然影响目标菌的生长，UPB的效果不能让人满意。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使得沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌复合增菌，抑制其它微生物的生长的培养基。

本发明的目的是这样实现的：

一种用于沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌复合增菌的培养基，以重量份数计，其配方组分如下：缓冲蛋白胨水0.5-1.5份、蒸馏水1000份，葡萄糖1.0-5.0份、甘露醇1.0-5.0份、丙酮酸钠0.03-0.06份、无水亚硫酸钠0.5-2.5份、柠檬酸钠1.0-10.0份、氯化钠5.0-25.0份、胆盐1-5份、亚碲酸钾0.0005-0.0025份，培养基的pH值为7.0-7.5。

以重量份数计，所述培养基配方优选为：缓冲蛋白胨水1份、蒸馏水1000份，葡萄糖1.25份、甘露醇1.25份、丙酮酸钠0.05份、无水亚硫酸钠1.25份、柠檬酸钠5份、氯化钠15.0份、胆盐2.5份、亚碲酸钾0.001份，培养基的pH值为7.2。

用于沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌复合增菌培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)按权利要求1所述配方，将缓冲蛋白胨水、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、亚硫酸钠、丙酮酸钠、柠檬酸钠和胆盐加入到蒸馏水中，加热熔解后121-125℃灭菌15-18min；

(2)待步骤(1)的培养液冷却到低于50℃，在无菌条件下，加入亚碲酸钾混匀；分装存于2-4℃下备用。

缓冲蛋白胨水是由蛋白胨、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钠组成。其中，蛋白胨、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钠的重量比为10∶3.57∶1.5∶5。

相对于现有技术，本发明具有以下优点：本培养基可融合致病菌的前增菌及选择性增菌两个步骤，缩短增菌时间至24小时；使得三种常见的致病菌同时增菌而其它的致病微生物生长受到一定的抑制；本发明的培养物可以直接做目标菌的分离培养及生物鉴定实验，也可以直接用于多重PCR检测，作出诊断报告。

附图说明

图1是沙门氏菌荧光PCR检测试剂盒检测结果图；

图2是副溶血弧菌荧光PCR检测试剂盒检测结果图；

图3是霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒检测结果图。

具体实施方式

为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表示的范围。