[发明专利]用于沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及一种同时对沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及其制备方法。

背景技术

我国是世界上畜牧业生产大国，肉产量居世界第一，国内人均肉类占有量达到58千克，高于世界40千克的平均水平。随着经济增长，食物消费发生了变化，畜产品消费量的快速增加，这种变化对肉类食品的质量安全要求有了更高、更迫切的要求。

在已知的致病菌中，沙门氏菌(Salmonella spp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)经常出现在各类肉制品中，有较高的致病率和致死率，是国家常规检测项目。根据国家食源性疾病监测网的统计资料显示，近10年来，在我国由微生物引起的食源性疾病事件中，沙门氏菌、金黄色葡萄球菌分别占117.9％和8.9％，是最常见和最主要的病因物质。据美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占世界第二位，仅次于大肠杆菌。在美国国内由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33％。就单增李斯特菌而言，外国的调查表明：各类产品中，新鲜肉类、肉类日制品和熟食肉类制品含有单增李斯特菌的比例最高，而国内发现肉类制品污染单增李斯特菌的比例最高。因此，通过控制和阻止沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌来改善食品供应的安全受到高度重视。在食品分配销售之前，快速准确的检测这三种菌是必要的、有时甚至是强制的。

尽管诸如基于抗体，核酸，生物传感器的现代检测方法已经大大提高了致病菌的检测速度，但能够满足的检测灵敏度仍然要求一个前增菌步骤。现今的研究侧重于强调在一个检测平台上检测多个致病菌，例如多重PCR技术、蛋白或抗体微阵列感受器、免疫吸收及DNA微阵列等技术。多重致病菌的检测方法经济实效，因为它可以减少处理大量样品仪器所占用的空间、供应物、试剂、员工，从而减少总的成本。为了加快多种致病菌在同一检测平台上的共检，一种合适的复合增菌培养基是急需的。营养肉汤等前增菌肉汤是经济的，但是缺乏抑制剂去选择目标菌，不合适于高背景微生物的原材料及未经处理的样品。

发明内容

本发明旨在提供可以同时支持沙门氏菌，金黄色葡萄球菌及单核细胞增生李斯特菌三种食源性疾病的同时生长的培养基，将常规检测方法中的前增菌步骤和选择性增菌步骤合二为 一，用于在一个检测平台上检测多个致病菌。

本发明通过选择合适的组分，并进行合理混配，经加热、溶解、混合、高温灭菌等步骤而获得一种使沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌及金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基。

本发明选择的配方如下：胰蛋白胨17份、蛋白胨3份、磷酸二氢钠2.5份、葡萄糖2.5份、七叶苷1.0份、蒸馏水1000份、丙酮酸钠2.5份、甘露醇5.0份、氯化钠20.0份、氯化锂2.0份、亚碲酸钾0.00015份、萘啶酮酸0.01份，pH值7.2-7.3。

本培养基含有抑制剂氯化锂、亚碲酸钾及萘啶酮酸。其中萘啶酮酸抑制革兰氏阴性菌的生长，但是对沙门氏菌的抑制作用不明显，氯化锂对三种目标菌没有明显的抑制作用，但对绿脓杆菌、志贺氏菌、小肠耶尔森氏菌等有抑制作用。亚碲酸钾对大肠杆菌及蜡样芽孢杆菌有抑制作用。三种抑制剂的添加可以起到抑制背景微生物的生长，使目标菌有较好的生长。三种菌对氯化钠的耐受性能好，提高其用量，抑制其他微生物的生长。磷酸二氢钠用于调节pH。胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、丙酮酸钠是培养基中基本的营养和支持成分。七叶苷、甘露醇分别用于促进单增李斯特菌及金黄色葡萄球菌的生长。标本接种后，在37℃培养，增菌24小时后，划线到三种目标菌各自的选择性培养基上，分离鉴别。

本发明的制备方法是：

(1)将胰蛋白胨、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钠、甘露醇、丙酮酸钠、氯化钠、七叶苷、氯化锂、按配比加入到990份蒸馏水中，加热溶解，冷却至室温后，矫正pH值为7.2-7.3。

(2)混匀，121℃灭菌15min；

(3)称取0.01份萘啶酮酸加入到5份浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液中，得到萘啶酮酸溶液。称取0.00015份亚碲酸钾加入到5份以灭菌的蒸馏水中，得到亚碲酸钾溶液。

(4)在无菌条件下，加入步骤3中配制的萘啶酮酸溶液5份及亚碲酸钾溶液5份；分装存于4℃下备用。