[发明专利]微小RNA-21的反义寡聚核苷酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及反义核苷酸及其应用领域，具体涉及微小RNA-21(miRNA-21)的反义寡聚核苷酸及其应用。

背景技术

微小RNA(microRNA，miRNA)是新发现的一类存在于真核生物中的长度约22nt的内源性非编码小分子单链RNA。它通过与靶mRNA的3’UTR结合，参与转录后基因表达调控。miRNA与细胞增殖、分化、凋亡、造血调控和脂肪代谢等过程密切相关。研究表明，一些造血组织特异性的microRNA与血液系统肿瘤的发生密切相关。Calin等^[1]最早发现与血液系统肿瘤相关的miRNA是miR-15a和miR-16-1，其基因定位于染色体13q14。在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)患者的肿瘤细胞中，miR-155是正常B细胞的10～30倍^[2]。儿童Burkitt淋巴瘤(BL)患者miR-155/BIC RNA表达是其他儿童白血病的100倍^[3]。当某些miRNA在肿瘤中表达升高时，表明其可能扮演着癌基因的角色。相反，某些miRNA在肿瘤中表达降低，提示其可能作为抑癌基因而发挥作用。此外，microRNA还与血液系统肿瘤的诊断、治疗、预后等密切相关。反义技术是研究基因治疗常用的方法之一，当microRNA高水平表达时，用反义寡核苷酸抑制其活性是目前比较理想的手段。

发明内容

发明人在前期研究中，采用实时定量PCR技术检测出人淋巴瘤Raji细胞中miRNA-21高表达，并推测其在血液系统肿瘤发生过程中有重要的作用。

本发明的目的是提供一种针对成熟miRNA-21的反义寡核苷酸(anti-miRNA-21oligonucleotides，AMO-miR-21)，它能有效的抑制miRNA-21的表达，并能直接或间接地抑制肿瘤的发生和肿瘤的生长。

为达上述目的，本发明采用的是反义核苷酸技术，具体技术方案是：首先提供了一种miRNA-21的反义寡核苷酸(AMO-miR-21)，其具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本发明的反义核苷酸可以经过本领域任何已知的保护性修饰。

本发明选择microRNA-21为靶基因，导入上述AMO-miR-21，研究其对淋巴瘤细胞生长和凋亡的影响。结果表明AMO-miR-21作用于Raji细胞后，细胞生长受到抑制，细胞凋亡明显增加，细胞内microRNA-21表达水平明显下调。说明用AMO-miR-21通过干扰miRNA-21表达有效抑制淋巴瘤细胞生长，同时表明miRNA-21可能作为淋巴瘤基因治疗的重要靶点。可见，本发明的AMO-miR-21具有直接或间接抑制肿瘤的发生和肿瘤的生长的作用，可用于制备预防或治疗肿瘤的药物，尤其是用于制备预防或治疗血液系统相关肿瘤(如淋巴瘤)的药物。

上述药物的形式可以是现有技术中的各种剂型，只要其活性成分包括本发明的AMO-miR-21。

上述药物可以是一种组合物，该组合物包括所述的AMO-miR-21。

上述组合物可以包括所述的AMO-miR-21和临床上公知的任一种可药用的载体；

上述组合物可以和一种或几种医学上已知的治疗药物组合使用，例如，与其他化疗药物/剂组和使用。

本发明相对现有技术的有益效果：

发明人确认了microRNA-21作为治疗或预防肿瘤，尤其是淋巴瘤的潜在新靶标，并首先针对该靶标提供一种AMO-miR-21作为其特异性抑制的药物，寡核苷酸AMO-miR-21。AMO-miR-21易于合成；由于是以核苷酸序列识别微小RNA miR-21，具有极高的特异性，更低的毒性；AMO-miR-21可与药用载体组成药用组合物用于治疗或预防肿瘤，并可以与其他抗癌化疗药物联合使用，取得更有效的抗肿瘤效果。

附图说明

图1是AMO-miR-21抑制Raji细胞活力的量效关系。

图2是AMO-miR-21抑制淋巴瘤Raji细胞生长的时效关系(0.4μmol/L)。

图3是细胞内miR-21的相对表达水平。

图4是流式细胞仪检测AMO-miR-21诱导的Raji细胞凋亡。

具体实施方式

为更好的说明本发明的实施方式，下面结合实施具体说明，但是具体实施例并不在任何意义上构成对本发明保护范围的限制。

材料和方法

1.1 反义寡核苷酸的设计与合成