[发明专利]结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白β亚基类荧光蛋白及其应用

权利要求书

1.一种结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：将藻蓝蛋白beta亚基编码基因克隆于表达质粒，表达得到藻蓝蛋白beta亚基。

2.根据权利要求1所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：所述的蛋白质的序列为序列1。

3.根据权利要求1或2所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：所述的蛋白质序列N端具有His-tag标记，但是His-tag标记不限于N端。

4.根据权利要求1、2或3所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：所述的结合藻蓝胆素PCB是指藻蓝胆素PCB通过硫醚键结合在130位，相当于原始藻蓝蛋白beta亚基的82位。

5.一种结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：将藻蓝蛋白beta亚基编码基因克隆于表达质粒，利用基因工程方法将其突变，表达得到藻蓝蛋白beta亚基突变体，对除结合色素的130外的所有位点进行突变不会对蛋白性质有较大的影响，属于同类蛋白，对此蛋白进行部分缺失，对蛋白性质无大的影响，属于同类蛋白。

6.根据权利要求5所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：将藻蓝蛋白beta亚基编码基因克隆于表达质粒，利用基因工程方法把其第201位(相当于原始藻蓝蛋白beta亚基第153位)半胱氨酸残基突变为异亮氨酸残基，表达得到藻蓝蛋白beta亚基突变体。

7.根据权利要求6所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白的突变体，其特征在于：所述的突变体的序列为序列2。

8.根据权利要求5或6所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：所述的结合藻蓝胆素PCB是指藻蓝胆素PCB通过硫醚键结合在130位，相当于原始藻蓝蛋白beta亚基的82位。

9.一种链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：将链霉亲和素编码基因和藻蓝蛋白beta亚基编码基因拼接后克隆于表达质粒，表达得到链霉亲和素和藻蓝蛋白beta亚基的融合蛋白。

10.根据权利要求9所述的链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：所述的蛋白质的序列为序列3。

11.根据权利要求9或10所述的一种链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：链霉亲和素在CpcB的N端，但是不限于在N端。

12.根据权利要求9、10或11所述的链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白，其特征在于：所述的结合藻蓝胆素PCB是指藻蓝胆素PCB通过硫醚键结合在258位，相当于原始藻蓝蛋白beta亚基的82位。

13.一种链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：将链霉亲和素编码基因和藻蓝蛋白beta亚基编码基因拼接后克隆于表达质粒，利用基因工程方法把其第329位(相当于原始藻蓝蛋白beta亚基第153位)半胱氨酸残基突变为异亮氨酸残基，表达得到链霉亲和素和藻蓝蛋白beta亚基的融合蛋白的突变体。

14.根据权利要求13所述的链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：所述的蛋白质的序列为序列4。

15.根据权利要求13或14所述的链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白突变体，其特征在于：所述的结合藻蓝胆素PCB是指藻蓝胆素PCB通过硫醚键结合在258位，相当于原始藻蓝蛋白beta亚基的82位。

16.结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白的应用，其特征在于：利用链霉亲和素标记的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白检测可溶性抗原或抗体的免疫检测。

17.根据权利要求16所述的结合藻蓝胆素PCB的藻蓝蛋白beta亚基类荧光蛋白的应用，其特征在于：所述的免疫检测方法包括以下步骤：

(1)将可与固相结合并能识别抗原的第一抗体包被固相上，封闭液封闭未结合抗体部分，备用；

(2)将待测抗原、识别抗原的第二抗体、识别第二抗体的标记生物素的抗抗体、标记链霉素亲和素的荧光藻胆蛋白按一定步骤加入固相中，充分反应；

(3)利用微孔板荧光检测仪或其它相应的仪器检测荧光，分析结果。