[发明专利]黄瓜绿斑驳花叶病毒的快速检测方法无效
| 申请号： | 200810222396.9 | 申请日： | 2008-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN101368217A | 公开（公告）日： | 2009-02-18 |
| 发明（设计）人： | 张珣;刘艳;王锡锋;李莉;周广和 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张涛 |
| 地址： | 100193*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黄瓜 斑驳 花叶 病毒 快速 检测 方法 | ||
1、黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的快速检测方法，采用一步实时定量RT-PCR反应，其特征在于：靶基因为CGMMV分离物CP基因。
2、根据权利要求1所述的黄瓜绿斑驳花叶病毒的快速检测方法，RT-PCR反应体系中的引物对和探针为：
引物对：CGMMV-F：5’-CCAGACTCAAGCGGGAAGAG-3’
CGMMV-R：5’-TCTACGACAGACGAGGGTAACG-3’
探针：CGMMV-T：5’-(FAM)TTCTTTCCGCGAGTCCCTGT(BHQ-1)-3’。
3、根据权利要求2所述的黄瓜绿斑驳花叶病毒的快速检测方法，所述RT-PCR反应体系为：
2倍反应缓冲液 10μl
Ex Taq聚合酶(5U/μl) 0.4μl
预制反转录反应液 0.4μl
上游引物(10μM) 0.2μl
下游引物(10μM) 0.2μl
探针(10μM) 0.2μl
总RNA 2μl
水 6.6μl
总体积 20μl。
4、根据权利要求3所述的黄瓜绿斑驳花叶病毒的快速检测方法，所述RT-PCR反应条件为：42℃反转录5min；95℃变性5s；95℃10s，60℃1min，45个循环。
5、根据权利要求1所述的黄瓜绿斑驳花叶病毒的快速检测方法，所述黄瓜绿斑驳花叶病毒为西瓜种子携带的黄瓜绿斑驳花叶病毒。
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