[发明专利]一种抑制人结肠肿瘤生长的新型抗体及其在制备用于早期诊断结直肠癌、子宫内膜癌以及胰腺癌的诊断剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言本发明提供特异识别结直肠腺癌、子宫内膜腺癌以及胰腺癌细胞糖链抗原，并能抑制结肠肿瘤细胞生长的单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞，以及所述抗体在制备用于早期诊断结直肠癌、子宫内膜癌以及胰腺癌的诊断剂中的应用。 

背景技术

结直肠癌指大肠内膜上皮细胞的恶性改变，包括异常分化，异常增殖以及细胞代谢和分泌异常等。临床上结直肠癌的绝大多数(>95％)为腺癌，其它类型的结直肠癌很少，包括淋巴瘤，良性瘤，恶性肉瘤等。结直肠腺癌的发生原因，诊断治疗和预防一直是基础医学和临床医学的研究重点。 

结直肠癌的死亡率居肿瘤死亡的第二位。美国每年诊断为结直肠癌的病例超过13万，死亡大于5万，死亡率约40％。结直肠癌在我国是第三位常见消化道肿瘤，位于食管癌和胃癌之后，但每年死于结直肠癌的病例估计超过4万人，约占肿瘤5.8％。我国结直肠癌发病一个明显特点是平均发病年龄45岁左右，比欧美等国提前12-18年，其中直肠癌较多，约占60％。近二十年，随着我国经济增长和人们生活水平的逐步提高，我国结直肠癌的发病人数逐年增加，发病更趋于年轻化。多年的临床研究发现，如果能够早期发现和准确诊断，几乎所有的结直肠癌都能在一定程度上进行治疗(Sanduleanu and Stockbrugger，2003)，因此有效的诊治手段对减少结直肠癌的死亡有重要意义。 

胰腺癌为恶性程度极高的消化道肿瘤，其死亡率占我国恶性肿瘤的第六位，在美国位于第四位。近年来，胰腺癌的发病率呈上升趋势，五年生存率仍很低，在诊断后的中位生存期为4～6个月(Coppola，2000)。胰腺 癌因其独特的解剖位置，症状隐匿，早期诊断非常困难，目前尚无有效的早期诊断方法。目前，用于临床的肿瘤抗原检测，均为非特异性的肿瘤相关抗原，只能通过选择适当的肿瘤标志物进行联合检测，来提高检测的灵敏性和有效性。 

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一组上皮性的恶性肿瘤，又称子宫体癌。以来源于子宫内膜腺体的腺癌最为常见，称为子宫内膜腺癌。子宫内膜癌为女性生殖道常见恶性肿瘤，发病率占女性生殖道恶性肿瘤20％～30％，且呈不断上升趋势，占女性全身肿瘤7％。在子宫内膜癌的治疗中，手术作为首选治疗已为世界范围所接受；术后化疗逐渐受到重视；但其早期诊治仍为当前主要问题。传统的诊断方法是根据临床表现，辅助检查结果综合分析，如内膜组织学的检查方可确诊。 

糖基化的变更是癌细胞的普遍特征，并且有一些类型的糖链结构被公认为肿瘤发生、发展的标志物，对特异性的肿瘤标志物检测可以达到早期诊断肿瘤的目的(Ho et al.，1988；Kim，1990；Kim，1998a)。消化道内膜上皮细胞发生恶变时往往引起糖基化改变，主要改变之一是粘蛋白(Mucin)在肿瘤中的过度表达，另一改变是粘蛋白的不完全糖基化。已有的研究资料表明肿瘤细胞不完全糖基化的结果是产生Tn，T和涎酸化Tn(S-Tn)抗原，这些抗原结构在正常情况下很少见(Boland et al.，1986；Itzkowitz et al.，1989；Bresalier et al.，1991；Itzkowitz et al.，1992；Kim，1998b；Hara et al.，2000)。尽管糖基化作用以及改变的糖链在肿瘤发生和发展过程中的病理作用机制还不清楚，但肿瘤特异的糖链结构已经成为肿瘤监测的标记物，用于发现肿瘤的早期改变，肿瘤发展和预后，肿瘤治疗效果评价，甚至可以成为肿瘤治疗的靶标。 

尽管结直肠癌的检出并不十分困难，但目前对于不同时期的结直肠癌诊断方法不一(Zhang et al.，2002；Winawer，2005)。传统的检查方法有肠镜，钡餐透视和肠道内容物检测等，诊断往往依赖临床医生根据检查结果，结合实践经验作出的推断。而对于局限于粘膜的早期肿瘤，传统检测方法很难作出准确的判断，需要灵敏的检测手段，现在已经建立了多种在分子水平检测技术，如RT-PCR，DNA探针检测以及特异的肿瘤细胞标记物检测等方法(Finkelstein et al.，1996a；Finkelstein et al.，1996b；Hammel和Soussi， 2000；Lassmann et al.，2002)，可以灵敏地对结直肠癌进行早期诊断。然而，灵敏的分子检测技术RT-PCR，DNA探针检测却因特异性低在临床应用较少，目前体外诊断主要是依靠对多种肿瘤标记物的检测，再综合分析结果进行判定。