[发明专利]一种黑平菇提取物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种黑平菇提取物及其制备方法与应用，特别涉及一种黑平菇抗植物病毒的蛋白提取物及其制备方法与其在防治植物病毒病中的应用。

背景技术

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)属于烟草花叶病毒属(TobamovirusGroup)，病毒为单链RNA，呈螺旋状。寄主范围广泛，可侵染番茄、辣椒、烟草等多种植物，田间最显著的症状是花叶、叶片畸形和植株矮缩，田间发病率一般在5％--20％，造成损失可达30％～50％，严重者绝收，是农业生产上的重要病害之一。

生产中，已有多类化学源抗植物病毒农药在应用，但其效果并不十分理想，且随着植物抗药性的增加和人们对生态环境的重视，化学源农药的发展受到了限制。近几年，人们把抗植物病毒的研究重点聚焦在寻找环境友好型且抗病毒活性更高的天然产物上。椐报道一些微生物中含有抑制植物病毒的活性物质，缺点是这些微生物一般较为昂贵，大规模生产存在困难，且获得其活性物质的操作步骤较为繁琐，不利于实际生产中的应用。

平菇(Pleurotus ostreatus)，属担子菌亚门(Basidiomycotina)，侧耳属(Pleurotus)。其具有该属的主要形态特征，担子果单生或丛生，菌盖直径4-15cm，扇形，边缘内卷；菌褶延生，可达10mm宽，中等密度，具小菌褶；菌柄侧生或稍偏生；菌丝系统为单系菌丝型，所有菌丝具锁状联合。该菌分布广泛，易于大规模培养，且生长迅速、产量高。

黑平菇是平菇的一个菌株，其子实体颜色为深黑色，色泽的深浅随温度的变化而有变化，栽培简易，深层发酵生物量高，品质好。到目前为止，国内外尚未有关于黑平菇菌株提取物抗植物病毒的任何报道。本发明首次以黑平菇为材料，对其菌丝粗提液进行了生物活性分析，并对其抗病毒活性物质进行了提纯和性质研究，为抗TMV的生物源农药开发提供了材料和技术支持。

发明内容

本发明的目的是提供一种黑平菇提取物及其制备方法与应用。

本发明所提供的黑平菇提取物的制备方法，是将黑平菇菌丝粉与pH值为7.0-9.0的磷酸缓冲液(PBS)混合，在2-6℃浸提，离心后的上清液即为黑平菇的菌丝粗提液。

所述方法中，黑平菇菌丝干粉的重量与磷酸缓冲液的混合比例为1g：10-20ml。

所述方法中，磷酸缓冲液的pH值为8.0；所述浸提的时间为1-3小时。

所述方法中，黑平菇菌丝干粉为黑平菇菌丝接种于液体培养基上，于21℃-36℃间培养3-8天后的菌丝干燥粉碎所得；所述液体培养基成分为：18g/L马铃薯淀粉、25g/L葡萄糖、30g/L玉米粉、25g/L豆浆粉、8g/L蛋白胨、5g/L酵母粉、3g/L牛肉膏、3g/LKH₂PO₄、1g/L K₂HPO₄、1.5g/LMgSO₄、30mg/L VB1。

所述方法中，菌丝培养的时间为3-8天，优选为5天。

所述方法中，黑平菇菌丝粉的粒径为60目以下。

所述方法中，黑平菇提取物溶液还经过下述步骤的提取：

1)将所述黑平菇的菌丝粗提液中加入硫酸铵至饱和度为40％，于2～6℃放置6～12小时后，离心，收集上清液；

2)在通过步骤1)得到的上清液中加入硫酸铵至饱和度为70％，于2～6℃放置6～12小时后，离心，收集沉淀得到黑平菇抗烟草花叶病毒蛋白提取物。

本发明所提供的黑平菇提取物为上述方法制备的黑平菇提取物。

本发明黑平菇提取物可用于防治烟草花叶病毒。具体方法为将上述黑平菇提取物用水稀释至总蛋白浓度为100-200ug/ml的黑平菇提取物溶液，喷施于长势一致的3-4叶期烟草上。

本发明的黑平菇提取物对烟草花叶病毒具有很好的抑制效果，在提取物调至蛋白浓度为200ug/ml喷施烟草72小时后，接种烟草花叶病毒，对烟草花叶病毒的抑制率达到77.49％。本发明的黑平菇提取物属于天然提取物，对人类和环境均无害。本发明黑平菇提取物的制备方法，简单容易操作，并且利用黑平菇菌丝为原材料，通过液体培养可获得大量菌丝，成本较为低廉。

附图说明

图1为本发明的黑平菇提取方法的流程示意图

图2为黑平菇菌丝粉粗提液级黑平菇蛋白粗提物物抗烟草花叶病毒实验照片

具体实施方式

下述实施例中所述的方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所示的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。