[发明专利]一种含利钠肽基因的药物及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种含利钠肽基因的药物，具体的说，是一种可以降低眼压， 治疗青光眼的基因药物，及其制备方法。

背景技术

青光眼是一种视神经病变，是目前主要致盲原因之一。据统计，每年全 世界大约700万人因本病导致失明。尽管青光眼的发病机制尚未完全清楚， 但眼压(intraocular pressure，IOP)升高是主要的危险因素之一。因此，降 眼压一直是青光眼的主要治疗手段，及时有效地降低眼压可减缓病程及降低 对视功能的损害。目前临床应用的降眼压药物均局限在能影响酶活性的小分 子化合物，如碳酸酐酶抑制药，或影响受体活性的小分子药物，如前列腺素 受体兴奋药、肾上腺素β受体阻滞药、肾上腺素α受体兴奋药和乙酰胆碱受体 兴奋药等。

由于如何能有效的控制青光眼病人的眼压是青光眼治疗的关键问题所 在，目前大多降眼压药存在费用高，疗效不理想，患者依从性和毒副作用等 问题。并没有一种非常理想的控制眼压的药物。

利钠肽是一种大分子的生物活性肽，包括心房利钠肽(atrial natriuretic peptide，ANP)，脑利钠肽(brain natriuretic peptide，BNP) 和C型利钠肽(C-type natriuretic peptide，CNP)。所有利钠肽均通过结 合细胞膜上特异性的利钠肽受体(NPR)而发挥作用。已知cGMP(guanosine 3’，5’－cyclic monophosphate)及可增加眼组织cGMP的制剂(如一氧化氮供 体)可降低眼压。利钠肽能增加细胞cGMP的生成，影响房水生成，因此有 降眼压的作用。其作用机制与可溶性鸟苷酸环化酶通路有关。cGMP激活依赖 cGMP的蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase，PKG)，PKG使能构成运 转体或离子通道的特异底物蛋白磷酸化，从而影响其生物效应，减少房水生 成。

利钠肽可通过激活其在组织中的相应受体参与眼压调节，有明显的降压 效果。由于利钠肽可被中性内肽酶水解后清除，所以需反复给药以维持治疗 效果，但又由于利钠肽角膜通透性差，只能通过结膜下、玻璃体腔注射进入 眼内(前者效差)；而反复结膜下、玻璃体腔注射无临床实用意义，因此利钠 肽未能广泛应用于青光眼的治疗。

现有技术中，利用利钠肽基因药物治疗青光眼国内外未尚见报道。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一种重组质粒，其含有如SEQ ID NO.1的核苷酸序列，质粒载体为逆转录病毒或腺病毒；优选的载体选择逆转 录病毒，进一步地，优选载体为慢病毒，最优选的载体为 pCDF1-MCS2-EF1－copGFP-CNP慢病毒表达载体。

本发明还提供一种药物组合物，它含有权利要求1～5任一一项所述的重 组质粒。

本发明还提供制备权利要求6所述药物组合物的方法，克隆含有如SEQ ID NO.1的核苷酸序列，将其与表达载体链接，然后包装成病毒颗粒，再制 备成药物制剂，所述表达载体为pCDF1-MCS2-EF1-copGFP-CNP慢病毒表达 载体。

本发明也提供所述的组合物在制备治疗青光眼药物中的应用，所述药物 优选为注射剂。

本发明是采用基因治疗的途径，即将利钠肽基因慢病毒表达载体导入大 鼠玻璃体腔，我们观察到目的基因的表达高，有明显的降低活体动物眼压的 效果，并且不良反应少，成本低廉，效果肯定，为青光眼治疗开创新的思路。

以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发 明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发 明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

附图说明

图1  RT-PCR从大鼠肾脏组织总RNA中合成并扩增CNP基因

M：核酸分子量标准；泳道1：RT-PCR产物

图2  限制性核酸内切酶消化鉴定重组质粒pCDF1-MCS2-EF1-copGFP-CNP

M：核酸分子量标准；泳道1，2，3：双酶切pCDF1-MCS2-EF1-copGFP-CNP 质粒；泳道4：pCDF1-MCS2-EF1-copGFP质粒。

图3  pCDF1-MCS2-EF1-copGFP-CNP测序结果

图4  慢病毒包装流程图