[发明专利]可激发机体对鼠疫产生免疫力的保护性抗原组合物及其应用

权利要求书

1、可激发机体对鼠疫产生免疫力的保护性抗原组合物，是按重量份数比为1-2： 2-1混合的天然F1抗原与rV270抗原的组合物。

2、根据权利要求1所述的保护性抗原组合物，其特征在于：所述rV270抗原为 经发酵表达的重组rV270抗原，表达方法为先根据已知的V抗原基因的核苷酸序列， 避开V抗原产生免疫抑制作用的区段设计带有裂解酶切割位点的引物，再在此引物的 引导下扩增带有裂解酶切割位点的rV270抗原基因，然后将含有上述带有裂解酶切割 位点的rV270抗原基因的重组表达载体导入宿主细胞进行表达，最后将表达产物进行 柱纯化，并在纯化过程中用裂解酶切除His标签，得到重组rV270抗原。

3、根据权利要求2所述的保护性抗原组合物，其特征在于：所述扩增带有裂解 酶切割位点的rV270抗原基因的引物对具有序列表中序列2和序列3的核苷酸序列或 序列表中序列4和序列5的核苷酸序列。

4、根据权利要求2所述的保护性抗原组合物，其特征在于：用于构建所述含有 rV270抗原基因的表达载体的出发载体为pET32a、pET28a、pET24a、pET-11c或 pET-22b；以pET28a为出发载体，构建的含有带有裂解酶切割位点的rV270抗原基因 的表达载体为pET28a-Xa/rV270或pET28a-Enterokinase/rV270。

5、根据权利要求2所述的保护性抗原组合物，其特征在于：发酵重组大肠杆菌 时需加入IPTG诱导剂，所加入IPTG的浓度为0.8-1.2mM，诱导温度为30-37℃，诱 导时间为3-4小时。

6、根据权利要求2所述的保护性抗原组合物，其特征在于：所述裂解酶为Xa或 肠激酶。

7、根据权利要求2所述的保护性抗原组合物，其特征在于：所述纯化柱为Co²⁺亲和层析柱或Ni²⁺亲和层析柱和Sephacryl S-200HR凝胶柱。

8、一种鼠疫亚单位疫苗，其活性成份为权利要求1-7任一项所述的可激发机体 对鼠疫产生免疫力的保护性抗原组合物。

9、根据权利要求8所述的鼠疫亚单位疫苗，其特征在于：所述疫苗中还包含CpG、 MF59、Al(OH)₃和CTB中的一种或多种作为免疫佐剂。

10、根据以上权利要求所述的保护性抗原组合物或鼠疫亚单位疫苗，其特征在于： 其中所述天然F1抗原是从鼠疫耶尔森氏菌EV76疫苗株中提取、纯化得到的多部分蛋 白中的一部分或是任意几部分的混合物。