[发明专利]一种检测成人早衰老综合症的基因诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测成人早衰老综合症的基因诊断试剂盒，更具体地说是一种利用WRN基因2806insA突变检测的试剂盒，该试剂盒及方法可用于该疾病的辅助诊断和新药开发，属于生物技术领域。

背景技术

Werner综合症(Werner syndrome，WS)，又称成人早老症(Adult progeria)，成人早衰老综合症(Adult premature aging syndrome)，是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病。WS的临床表现主要发生在结缔组织，内分泌系统，免疫系统，神经系统等。包括：身材矮小，早生华发，皮肤纤维化、硬皮样改变，白内障，皮下组织钙化，糖尿病，甲状腺功能低下，高脂血症，系统性红斑狼疮，痴呆，精神分裂症等。WS患者在童年发育基本正常，到18岁后开始出现各种症状，由于皮下脂肪菲薄，以及皮肤纤维化，形成了特殊的面部特征，包括假性突眼，喙状鼻，口周放射状沟纹，牙齿突出，下颌后缩，被称为“鸟样面容”。WS患者可伴发各种肿瘤，包括软组织肉瘤，骨肉瘤，黑素瘤，甲状腺癌，脑(脊)膜瘤等。由于WS患者早期出现多系统老化表现，其寿命大大缩短，平均寿命仅47岁。

WS发病机制的研究对阐明人类衰老的发生机制以及老龄化相关疾病具有重要的借鉴作用，因此WS被称为“人类老化的天然基因模型”。1992年GOTO等将WRN基因(WRN)定位于8p11.1-21.1，WRN全长5.2kb，包含35个外显子，编码1432个氨基酸。WRN蛋白是RecQ家族成员DNA解螺旋酶，它包含了7个解螺旋酶的基序，其中2个是ATP结合蛋白。DNA解螺旋酶的重要作用是在DNA复制过程中形成解链复合物，参与DNA解链和DNA损伤修复。结构分析显示WRN蛋白包括蛋白中部的RecQ型解螺旋结构域和N端的核酸酶结构域。WRN蛋白既有3’-5’解螺旋酶活性，又有核酸外切酶活性。在DNA代谢过程中产生的各种DNA结构均是WRN蛋白的底物。

WRN蛋白C端1369-1402个氨基酸残基具有核酸定位作用。另外，在RecQ解螺旋酶结构域中949-1092个氨基酸残基也具有核酸定位作用。WRN蛋白主要定位在细胞核仁中，当DNA损伤时WRN蛋白在细胞核DNA损伤部位聚集。在WRN蛋白C端有两个结构域：RecQ解螺旋酶保守结构域(helicase conserved region，RQC)和解螺旋酶，核糖核酸酶，C端保守结构(helicase，RNaseD，C-terminal conserved Regi on，HRDC)。研究证实WRN蛋白通过这两个结构域与底物DNA或蛋白相互作用。在WS患者中均发现WRN基因突变，到2006年共发现50个突变点，这些突变包括错义突变、框移突变、无义突变等，分布于各个外显子。WRN基因具有明显的异质性，不同种族突变形式完全不同。目前对于中国人群中Werner综合症的报道均为个案报道，也缺少基因诊断的研究，对于中国人群WRN基因突变热点研究尚属空白。

经过现有国内外文献检索，未见有Werner综合症WRN基因2806insA突变的相关报道，中国人群中WRN基因的发现，不仅会促进该病发病机理等基础研究的发展，还将大大促进Werner综合症的基因诊断和治疗的开展。通过产前筛查及新生儿WRN基因突变筛查，可以降低Werner综合症患儿的出生率，指导携带致病基因的患者生活行为，预防疾病发生，大大缓解社会压力。另外WRN基因研究对长寿与衰老的研究都会起到重要作用。体外检测Werner综合症相关基因WRN的2806insA突变的试剂盒对于这些学科研究与发展都是不可或缺的。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是，提供一种诊断成人早衰老综合症(Werner综合征)的方法，通过检测疑似患者的待测样本是否存在具有本发明所述的2806insA突变而确认患者是否Werner综合征，为临床诊断和治疗提供参考。

本发明要解决的第二个技术问题是，提供一种成人早衰老综合症(Werner综合征)2806insA突变的试剂盒。

本发明要解决的第三个技术问题是，提供成人早衰老综合症(Werner综合征)2806insA突变在诊断Werner综合征相关疾病中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种诊断成人早衰老综合症的方法，包括如下步骤：

(1)采集待测个体的血液、体液或组织标本，提取DNA；

(2)以该DNA为模板，以针对WRN基因所述突变位点设计的PCR引物进行PCR反应，得到PCR反应产物；