[发明专利]一种血小板膜糖蛋白寡肽或其修饰物/衍生物以及它们的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的合成的可穿膜寡肽，其氨基酸序列及其抑制血小板功能的能力。

本发明属于分子生物学和血液病学。

背景技术

血栓栓塞性疾病，如心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞等，是当前严重危害人类健 康，导致死亡率较高的原因之一，预防和治疗血栓形成，已成为当前临床上重要的防治方法。 血小板在血栓形成过程中起着十分重要的作用。在正常血液循环过程中，血小板处于静止状 态，而在发生血管壁损伤处，特别在血管中高切应力环境下，血小板就会通过其表面膜糖蛋 白(GP)Ib-IX复合物中的Ib受体与血浆von Willebrand因子(vWF)结合并粘附于受损血 管处暴露的内皮下组织，进而引起粘附的血小板被内皮下组织或局部形成的凝血酶所激活， 发生释放反应和花生四烯酸代谢。由前者分泌释放的ADP或由后者形成的血栓烷(TX)A2均 可引起血小板聚集。血小板聚集是由血小板GP II b/IIIa受体所调解，激活的GP II b/IIIa受体 通过纤维蛋白原分子在相邻的血小板之间形成横桥，构成血小板聚集的骨架，最终导至血栓 形成。血小板释放产物TXA2等还可进一步与血浆蛋白作用促进血栓的形成。可见，血小板 膜糖蛋白GPIb与vWF的结合是血小板血栓形成的起始关键过程。而GPIbα的膜外部分含有 vWF的结合位点，最新研究表明，细胞内信号分子14-3-3蛋白与GPIbα C末端的结合，是调 控GPIb-IX与vWF结合并进而导致血小板活化以及形成血小板血栓的关健。

有效抑制各阶段血小板的作用，是预防或治疗血栓形成性疾病的一个基本思路和有效途 径。而目前国内外临床上常用抗血小板药物如阿斯匹林、噻氯匹啶等都是抑制血小板与vWF 结合黏附后功能的某一环节，这些药物，在发挥抗栓作用的同时，由于此前粘附而活化的血 小板释放出的生物活性物质，同样会对出、凝血的生理平衡产生消极影响，而均存在着较大 的缺点如引起血小板减少，出血以及使用后栓塞的再形成。而以调节或抑制vWF与血小板 GPIbα的结合为靶标，创制一种可调节或抑制血小板的始动活化途径，从而调节或抑制血小 板聚集的新型抗血小板药物，必将会对血栓性疾病的治疗和预防产生意想不到的效果。

现有研究表明，在调控血小板GPIb-IX与vWF结合过程中，细胞内信号分子14-3-3蛋白 与GPIb的结合起关键作用。在GPIb中，已知有3个14-3-3蛋白结合位点，分别为GPIbα 609 位点，GPIbα 587-590位点和GPIbβ 166位点。这些位点对GPIb与vWF结合的作用各不相同， 但这些位点都是以磷酸化Ser为中心的结构域。在此领域的多年研究之中，本室发现在GPIbα 559位点为14-3-3蛋白的又一结合位点，故此本发明在现有研究基础上，本室研究创建了新 的可穿膜寡肽。

发明内容

本发明目的：就是研究构建新的寡肽序列，并合成可穿膜寡肽，对其抑制血小板粘附、聚 集的功能进行研究验证，最终创制一种具有自主知识产权，可有效抑制血栓形成，并对出、 凝血功能不产生消极影响的新型药物。

技术方案：本发明应用抗体制备技术制备血小板GPIbα 559Ser磷酸化抗体，ELESA检测 所制备抗体与血小板结合情况，从而设计合成新的可穿膜寡肽，瑞斯托霉素和ADP诱导血小 板聚集试验对可穿膜寡肽功能进行研究。结果表明可穿膜寡肽可降低瑞斯托霉素诱导的血小 板聚集，而对ADP诱导的血小板聚集没有影响。

本发明的优点在于：

1.可穿膜寡肽只对血小板GPIbα与vWF的结合功能有抑制作用，即对血栓形成的起始 有抑制作用，而对其他凝血功能无影响。

2.不同浓度的可穿膜寡肽，对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集作用的抑制程度不同，即 对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集作用具有调节功能，具有良好的药物开发潜力。

3.可穿膜寡肽分子量较小，对人体免疫原性低，可直接用于人体。

4.可穿膜寡肽分子结构稳定，易于合成与纯化，可大量生产，具有广阔的产业化前景。

而现有国内外临床上使用的抗血小板药物都是抑制血小板黏附后功能的一个环节，其防 栓作用相对较弱，且对出、凝血生理平衡产生消极影响，并受适用范围、生产工艺、知识产 权等等诸多因素的限制。

附图说明

图1显示制备抗血小板GPIbα 559Ser磷酸化抗体的免疫原即所合成的小分子寡肽的氨 基酸序列。