[发明专利]检测百菌清农药残留的方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种百菌清人工完全抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将百菌清和氟化钾溶解于乙二醇溶液中，油浴反应；

2)将反应液冷却到室温后，倾入冰水中，沉淀完全后，经后处理得白色粉末，即为半 抗原，其结构为2，4，5-三氯-6-(2-羟基乙氧基)-间苯二氰；

3)将上述半抗原溶解于DMF中，再加入咪唑酮进行反应，加入牛血清白蛋白，搅拌；

4)进行透析，离心，干燥，获得具有如下结构的百菌清人工完全抗原的乳白色粉末：

2.一种百菌清多克隆抗体，其特征在于，根据权利要求1所述的方法制备的百菌清人 工完全抗原免疫动物得到。

3.一种ELISA检测百菌清农药残留的方法，其特征在于采用如权利要求2所述的多克 隆抗体作为一抗，包括如下步骤：

(1)对待测样品进行包被；

(2)用封闭液进行封闭；

(3)加入权利要求2的多克隆抗体作为一抗；

(4)加入酶标羊抗兔二抗，进行孵育；

(5)加入新鲜配制的TMB底物溶液；

(6)加入终止反应液终止反应；

(7)结果判定：将测定的OD值与阴性对照比较，或者在白色背景下，直接用肉眼观 察来确定阳性或阴性结果。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：第(7)步结果判定：是用酶标仪于450nm 和655nm处进行双波长扫描，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对 照OD值的2.1倍，即为阳性，或在白色背景下，直接用肉眼观察结果，反应孔内颜色越 深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述待测样品为蔬菜汁。

6.一种百菌清ELISA检测试剂盒，包括：PBS的浓缩洗涤缓冲液、百菌清标准液、 如权利要求2的抗百菌清的多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体、包被缓冲液、 封闭缓冲液、底物溶液、浓缩底物缓冲液、反应终止液、H₂O₂。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述百菌清标准液的浓度为10～ 100ug·mL^-1。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述PBS的浓缩洗涤缓冲液的pH 7.4， 包被缓冲液的pH 9.6，浓缩底物缓冲液的pH 5.5。