[发明专利]利用花生壳、马铃薯淀粉废液发酵生产绿色木霉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及花生壳与马铃薯淀粉生产过程中产生废液的资源化利用，具体来说，是利用马铃薯加工过程中的废液与花生壳生产绿色木霉(Trichoderma viride)，属于生物农药技术领域。

技术背景

木霉菌属半知菌亚门，丛孢梗目，丛孢梗科，是当前公认的很有前途的生防菌，能够防治多种作物上的多种病害。木霉菌以其资源丰富、持效期长、作用方式独特、对非靶标生物安全及不污染环境等优点而倍受重视。目前，已经发现木霉菌具有多种生物防治作用，如中国专利(授权公告号：CN 100340655C)公开了可利用绿色木霉菌株LTR-2制备植物抗生素及防治土传病害的方法；中国专利(授权公告号：CN 1263824C)公开了一种利用含有绿色木霉的制剂，该制剂可以用于沙化土壤的保水和改良，中国专利(公开号：CN 101063088A)公开了一种利用菇渣生产绿色木霉的制剂，该制剂可以应用于连作重茬严重的保护地蔬菜生产引起的土川病害预防和防治，中国专利(授权公告号：CN1266266C)公开了一种以绿色木霉味主要成份的微生物菌剂及其制备方法，可以有效地解决规模化养殖场畜禽粪便对环境的污染，同时实现废弃资源的综合开发利用。

花生作为一种主要经济作物，在我国种植面积很大，产量很高。据调查，仅开封五县2000年花生种植面积就达135万亩，产花生33.8807万吨，同时产废弃物花生壳10万多吨。目前，花生壳主要作为燃料或当作废渣弃去，造成自然资源的极大浪费。中国专利(授权公告号：CN 1179627C)公开了在花生壳粉、玉米杆粉等中加入泥炭土等经高温制成生物活性营养钵，中国专利(公开号：CN101215473A)公布了一种利用花生壳玉米芯等制取生物柴油的方法。

本专利利用花生壳与马铃薯淀粉生产过程中产生的废液生产绿色木霉，使花生壳与马铃薯淀粉废液资源化，本专利方法未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够利用花生壳，马铃薯淀粉废液发酵生产绿色木霉的方法。

本发明所述的以马铃薯淀粉废液，花生壳生产生防菌的生产方法如下：

1、马铃薯淀粉废液预处理：用盐酸与氢氧化钠将pH调至5-7，加入一定氮源，高温高压灭菌15分钟；

2、花生壳处理：花生壳与马铃薯淀粉废液一定比例混合后高温高压灭菌；

3、液体种子制备：向高温高压灭菌的PDA液体培养基中，接种绿色木霉孢子，培养至生长后期；

4、液态发酵：向经过高温高压灭菌的的马铃薯淀粉废水中接种的液体种子，通无菌空气，发酵培养；

5、固态发酵：培养一定时段的发酵液与高压灭菌的花生壳按一定比例混合，搅拌均匀，同无菌空气固态发酵3-7天。

6、菌剂制备：收集绿色木霉孢子，加入硅藻土、泥炭，调整孢子数为10⁸-10⁹个/克制成绿色木霉菌剂。

由本发明技术方案生产的绿色木霉能够高效防治多种真菌类植物病害，而且无公害，生产成本低，并且有效地利用了马铃薯淀粉废液，花生壳。以下通过具体实施例详细说明本发明的实施，目的在于帮助读者更好地理解本发明的精神实质，但不作为对本发明实施范围的限定。

实施例1：绿色木霉生物农药制备

种子培养基制备：称取200g土豆，切碎，于1L自来水中煮沸30分钟，过滤除去残渣，加入20g葡萄糖，定容至1L，即得土豆培养基。分装入5个1L的三角瓶中，121℃灭菌20mm。

发酵培养基制备：马铃薯淀粉废液利用氢氧化钠溶液调节pH至6.0-7.0。

花生壳灭菌：花生壳与马铃薯淀粉废液按照1∶1(W/W)混合后，121℃灭菌20min。

液体种子制备：向PDA液体培养基中接种绿色木霉，于27℃，摇瓶200r/min，恒温摇床振荡培养24小时，得到液体种子。

液态发酵：将上述发酵培养基装罐到10L的发酵罐中，121℃灭菌15min，按照5％的接种量接种液体种子，在27℃恒温，通无菌空气的条件下，发酵1至2天。

固态发酵：将上述发酵液与灭菌花生壳按照3∶1(W/W)固态发酵，发酵期间通无菌空气，待孢子丰满，收集后加入硅藻土，泥炭，计数后包装。

实施例2：对绿豆立枯病防治效果

制备后保存三个月的绿色木霉菌剂，按照质量比1∶20的比例与多年种植绿豆且绿豆立枯病发病严重的田块细土充分混合，置于塑料花盆(8crn)，对照为以花生壳与土壤混合。播种后20d统计出苗率和病害的严重度，计算相对防治效果，统计出苗情况及病害严重度，实验重复3次。发现经绿色木霉处理的绿豆立枯病发病率较对照减少70％。