[发明专利]一种防治安氏隐孢子虫病的卵黄免疫球蛋白

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及到水产动物养殖技术领域，特别涉及到一种防治对安氏隐孢子虫病的卵黄免疫球蛋白(IgY)及其应用、。

背景技术

1907年，Tyzzer在小鼠粘膜组织切片首次发现隐孢子虫(Cryptosporidiumspp.)，隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)成为一种世界性分布的人兽共患寄生虫病。该原虫广泛寄生于哺乳类、禽类、爬行类和两栖类等240种以上的人和动物，可致人类腹泻，尤其是婴幼儿和免疫功能低下或缺陷者致命性的腹泻。本病主要引起畜禽腹泻和呼吸道症状，导致生产性能下降或死亡。近年来，对隐孢子虫病研究已成为医学界、兽医学界研究关注的热点。

卵黄抗体(egg yolk immunoglobulins，IgY)是禽类B淋巴细胞在抗原物质刺激下所产生并沉积在卵黄中的能与抗原发生特异性反应的一种球蛋白，主要是免疫球蛋白G，是禽类在长期进化过程中形成的用于提高雏禽抵抗力的物质。IgY与哺乳动物的IgG在分子结构上相似，但其又具一些特有的生物学特性：IgY的Fc区不与人或细菌Fc受体结合，IgY不激活哺乳类动物和人的补体系统，IgY不与人血清中抗哺乳动物抗体的抗体反应，如人的抗IgG抗体，IgY不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG)结合，这在免疫诊断中具有重要意义。

病原特异性IgY抗体，由于其对病原的针对性，从而可以用于特异性治疗，而且因其来源于鸡蛋，没有毒副作用、不存在药物残留、不存在环境污染，对于生产绿色食品，无疑具有很大的优势。特别对于药物治疗效果不佳，或者没有可用于治疗的病原性疾病，可以用此方法生产IgY生物制剂。

隐孢子虫病目前尚没有有效治疗药物，虽然在世界范围内作了大量的药物筛选工作，但到目前为止，仍然没有进入临床应用的文献报道。关于抗隐孢子虫IgY抗体制备方法的研究，国内外罕见报道，本研究通过研制抗安氏隐孢子虫(C.andersoni)IgY抗体，制备包含不同抗原成分的免疫抗原，通过IgY抗体和血清抗体产生的动态规律、抗体应答的持久性，确立了最佳制备方法，为今后制备大量隐孢子虫特异性IgY抗体，或其它弱免疫原性病原特异性IgY抗体提供了最基础的技术。

公开号为CN1569229名称为抗口腔及上呼吸道感染IgY产品及其应用的专利申请，公开了涉及多种具有特异性抗感染功能的鸡卵黄免疫球蛋白IgY的制备技术、用于预防龋齿、治疗牙周病及口腔粘膜病、预防及治疗流行性感冒、治疗咽喉炎。公开号为CN1621090名称为特异性卵黄免疫球蛋白口服冻干制剂及其制备方法及用途的专利申请，公开了一种特异性卵黄免疫球蛋白口服冻干制剂及制备方法和用途。该冻干制剂的组份包括特异性免疫球蛋白、赋型剂和溶剂中溶质。其它还有公开号为CN1583792、CN1602720 CN1620886、CN1646565、CN1201693的专利、，虽然公开了许多卵黄免疫球蛋白的制法和应用，但没有针对防治对安氏隐孢子虫病的卵黄免疫球蛋白(IgY)及其应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种防治安氏隐孢子虫病的卵黄免疫球蛋白。

本发明的目的是通过如下技术方案来实现：一种防治隐孢子虫病的卵黄免疫球蛋白，其制作步骤如下：

a.从安氏隐孢子虫阳性粪便中收集卵囊，

b.然后将收集的卵囊进行分离；

c用蔗糖梯度离心法纯化分离后的卵囊；

d.然后将卵囊制备成安氏隐孢子虫抗原；

e.用安氏隐孢子虫抗原免疫产卵禽，然后收集其所产禽卵；

f.从禽卵中收集蛋黄，以蒸馏水稀释，离心取上清液，经水稀释硫酸铵盐析法纯化得到卵黄免疫球蛋白。

步骤a中：所述的卵囊是指收集阳性畜粪便中卵囊，卵囊呈长卵圆形，卵囊大小为6.21～9.1μm×5.12～7.25μm。

步骤b中：所述的进行分离是指用饱和蔗糖溶液漂浮法收集卵囊，27％(W/V)的蔗糖溶液粗提卵囊。

步骤c中：所述的用蔗糖梯度离心法纯化分离后的卵囊是指

①配制蔗糖原液：蔗糖500g，蒸馏水320mL溶解后，高压灭菌；

②配制PBS缓冲液：NaCL 8.0g，KCL0.2g，KH2PO40.2g，Na2HPO4·12H2O2.9g，蒸馏水1000mL，调PH值7.4后灭菌；

③将蔗糖原液与PBS缓冲液配制为

③将蔗糖原液与PBS缓冲液配制为

a、1份蔗糖原液加入1份PBS缓冲液后蔗糖浓度(W/W％)为30.4称为1∶1蔗糖水；