[发明专利]猪袋装冷冻精液保存液及其保存方法

说明书

一、技术领域：

本发明涉及动物繁殖领域，涉及一种精液保存液及精液的保存方法，特别是涉及一种猪袋装冷冻精液保存液及精液的保存方法。

二、技术背景：

随着养猪业的发展需要，猪常温保存精液的人工授精已经不能满足现代养猪业的发展，猪的冷冻精液人工授精技术已成为国内外养猪生产中亟待解决的问题。

猪冷冻精液与常温精液保存相比，冷冻精液可以使优良基因得到无限期的保存(如本地猪种资源保护)，延长公猪使用年限，不受该公猪死亡、损伤、采精间隔或繁殖不育的限制，有利于人为地使用高性能水平的种公猪与较多数的母猪配种，获得更大的遗传进展；使种猪选择不受时间或地理位置差异的限制，可以引进国外高性能公猪冻精取代活体公猪，可节省外汇支出；有利于人工授精体系的完善，公猪冷冻精液完全可以在后裔测定或疾病检测后开始大量供应，为稳定的遗传进展和严格的生物安全体系建设提供额外保障。从健康角度考虑，冻精为疾病检测提供了足够的时间，冻精还可在疾病暴发时利用大型的人工授精站提供稳定的精液供应保障。

目前，对猪精液冷冻方法主要有颗粒冷冻精液、细管冷冻精液和安瓿瓶冷冻精液三种方法。颗粒冷冻精液的颗粒大小一般在0.1ml左右，颗粒过大时里层和外层精液的受温过于不均匀，效果较差；若颗粒过小，则在冷冻时又费事也不太方便。细管冷冻精液的细管类型有0.25ml型和0.5ml型两种，如要满足1头母猪的输精剂量，0.5ml的细管至少要10个以上，否则，无法满足精子的总量要求；安瓿瓶冷冻精液的方法，存在制作工艺繁杂、成本较高、安瓿瓶易破裂等问题。

专利号为200410013364.X的文件公开了一种常温下的猪精液的保存液，该保存液原料为葡萄糖、牛血清白蛋白、氯化钾、柠檬酸钠、乙二胺四乙酸、碳酸氢钠、抗生素和水等成分。该发明在一定程度上可以高优秀种公猪的精液利用率，但精液的保存时间较短，一般只有7天左右，不能长期保存。

三、发明内容：

本发明要解决的技术问题：提供一种猪袋装冷冻精液保存液和精液的保存方法，该方法能有效地保持精子的活力、使用简单、方便，成本低廉，可满足猪冷冻精液人工授精的需要。

本发明的技术方案是：

猪袋装冷冻精液保存液，所述保存液由A液和B液组成，A液配制：称取葡萄糖1～10克、乳糖1～10克、谷氨酸钠1～8克、聚乙烯吡咯烷酮1～8克，依次加入100毫升蒸馏水中，使其完全溶解，再加入抗生素10～20万国际单位，用细菌过滤器过滤，然后加入维生素B₁₂0.02～0.1克、安钠咖0.02～0.1克、卵黄10～30毫升，充分混匀后得到A液；B液配制：取A液50～100毫升，加入甘油2～10毫升、N-N-二甲基甲酰胺2～10毫升，充分混匀后得到B液。

所述A液成分为：葡萄糖1～3克、乳糖1～3克、谷氨酸钠1～2克、聚乙烯吡咯烷酮1～2克，抗生素10～15万国际单位、维生素B₁₂0.02～0.04克、安钠咖0.02～0.04克、卵黄10～20毫升；所述B液成分为：A液75～95毫升、甘油2～6毫升、N-N-二甲基甲酰胺2～6毫升。

所述A液成分为：葡萄糖3～7克、乳糖1～3克、谷氨酸钠2～6克、聚乙烯吡咯烷酮2～5克、抗生素15～20万国际单位、维生素B₁₂0.04～0.08克、安钠咖0.04～0.08克、卵黄10～20毫升；所述B液成分为：A液70～100毫升、甘油4～8毫升、N-N-二甲基甲酰胺4～8毫升。

所述抗生素为硫酸庆大霉素、青霉素或链霉素。

所述A液和B液的pH值为6.5～7.5、渗透压为300～500mmol/L。

一种猪袋装冷冻精液保存液保存精液的方法，该方法包括以下步骤：

(1)采精和浓缩：对公猪进行精液采集、精液离心分离，收集下层液体，控制精子密度在10亿/ml以上，保存、备用；

(2)降温：按A液和浓缩精液的比为1:0.5～2的比例，在18～35℃下将精液等温稀释，然后冷藏，经1～2小时降温至1～4℃；

(3)平衡：将冷藏精液用B液进行第二次稀释，B液和冷藏精液的配比1:0.5～2，稀释后精液在1～4℃下保存1～2小时；

(4)分装：将精液分装成袋；

(5)冷冻：将袋装精液在液氮中保存。

所述精液分装成袋是将精液用无菌袋按每袋5ml精液分装。

所述在液氮中保存是将袋装精液先在距离液氮面2～5cm处熏蒸5～10分钟，然后投入液氮中冷冻保存。

本发明的积极有益效果：