[发明专利]荧光素类钙离子指示剂的合成与应用

权利要求书

1.具有如下结构通式(1)的荧光素类钙离子荧光指示剂：

R₁、R₂选自氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。

2.权利要求1所述的荧光素类钙离子荧光指示剂的合成方法，其主要合成步骤如下:

(1)R₁、R₂取代的1-氯-2-甲基-5-硝基-4-(2-(2-硝基苯氧基)乙氧基)苯经还原得到R₁、R₂取代的2(-2-(2-氨基-4-氯5-甲基苯氧基)乙氧基)苯胺；

(2)R₁、R₂取代的2(-2-(2-氨基-4-氯5-甲基苯氧基)乙氧基)苯胺与溴乙酸甲酯在二异丙基乙基胺中合成得到R₁、R₂取代的2-(2-(2-氨基-4-氯-5-甲基苯氧基)乙氧基苯-N，N，N’，N’-四乙酸甲酯；

(3)R₁、R₂取代的2-(2-(2-氨基-4-氯-5-甲基苯氧基)乙氧基苯-N，N，N’，N’-四乙酸甲酯甲酰化后与4-氯间苯二酚在甲基磺酸作用下缩合得到荧光素类钙离子指示剂；

步骤(1)～(3)所述R₁、R₂选自氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。

3.根据权利要求2所述的荧光素类钙离子荧光指示剂的合成方法，其特征在于：缩合得到的荧光素类钙离子指示剂粗品与无水甲醇酯化得到荧光素类钙离子指示剂甲酯，经柱层析分离得到酯化纯品，最后水解得到荧光素类钙离子指示剂纯品。

4.根据权利要求2所述的荧光素类钙离子荧光指示剂的合成方法，其特征在于：步骤(1)使用铁粉作为还原剂。

5.根据权利要求3所述的荧光素类钙离子荧光指示剂的合成方法，其特征在于：柱分离流动相使用甲醇和乙酸乙酯的混合溶剂，固定相为53-75μm的柱层析硅胶。

6.权利要求1所述的荧光素类钙离子荧光指示剂在胞内游离钙离子浓度测定中的应用。