[发明专利]基于模拟人血管内皮细胞生长因子VEGF表位的疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种基于模拟人血管内皮细胞生长 因子VEGF的模拟表位及用该模拟表位构建的在体内能够诱导出针对VEGF分子自 身抗体的多肽表位疫苗及其制备方法。

背景技术

1、VEGF分子及其单克隆抗体的相关研究

1.1VEGF分子

VEGF相对分子量为34-42KD，是由分子量为17-22KD的同源二聚体通过二 硫键联接而成。人类VEGF的基因结构位于染色体的6p21.3，该基因全长为28kb， 编码VEGF的基因长约1.4万个碱基对，由8个外显子和7个内含子交替构成。 由于VEGF mRNA的不同剪切方式可使其有5种VEGF异构体。根据氨基酸的 大小命名为V EGF206(包含所有外显子及部分第7个内含子)、VEGF189(包 含8个外显子)、VEGF165(缺少外显子6)、VEGF145(缺少外显子7)及VEGF121 (缺少外显子6和7)，体内以VEGF165较为常见。5种VEGF的异构体都具有 诱导内皮细胞增生的相对活性，其功能上的差异主要在于它们与细胞表面和细胞 外基质中肝素的亲和力不同。

VEGF分子通过与血管内皮细胞表面特异性受体结合发挥生物学效应。其主 要的生物学功能是促进内皮细胞增殖、促进血管生长和增加血管通透性。现已证 明，VEGF与受体结合后可以迅速增加细胞内Ca²⁺水平，通过磷酸肌醇特异性磷 酸脂酶C途径，使细胞内IP₃水平升高，传导细胞内信号，最终完成生物学效应。

1.2VEGF单克隆抗体的发展现状

过去的大约30年中，由和Milstein提出的单克隆抗体技术已经为一系 列疾病的的体外诊断提供了契机。然而，单克隆抗体的特异性识别抗原的特性在 人类疾病的免疫治疗只是在近10年中才崭露头角。目前，单克隆抗体(mAbs) 在临床中被用于癌症的诊断和治疗，控制自体免疫性疾病、移植物抗宿主反应和 同种异体移植排斥，以及治疗细菌感染引发的脑(脊)髓炎、心肌损伤和可逆的 药物中毒等。

VEGF是促进肿瘤血管生长作用最强的分子之一，多种肿瘤都高分泌该分子； 因此该分子成为抗血管生成治疗肿瘤方法中的重要靶标。阿瓦斯汀(Avastin)是 一种人源化抗VEGF单克隆抗体，可与人VEGF结合，阻断VEGF与受体结合后 介导的下游信号通路，从而抑制人VEGF的生物学活性，包括抑制内皮细胞促有 丝分裂活性、血管通透性增加活性和促血管生成活性，达到抗肿瘤目的。

Avastin是第一个被FDA批准用于抗肿瘤血管生成治疗的单克隆抗体制剂， 2004年由FDA批准用于结直肠癌及非小细胞肺癌的治疗，它的出现为抗肿瘤血管 生成疗法开创了新天地。Avastin优势有：其作用靶点直接暴露于血液中，便于药 物直接作用；靶点基因表达稳定，不易产生抗药性；无需考虑肿瘤组织学特性； 可抑制肿瘤转移；有下游放大效应；不良反应相对小。Avastin与放、化疗联合具 有协同作用：(1)可使肿瘤区血管生成正常化，组织间高压减轻，利于化疗药向 肿瘤区输送；(2)放、化疗所致局部肿瘤区缺氧可促VEGF表达，帮助肿瘤细胞 抵抗放、化疗的凋亡诱导机制，而联用Avastin将预防这种继发的保护效应，使治 疗反应增敏。

Avastin不良反应主要是出血和胃肠穿孔，另外还有虚弱、疼痛、高血压、腹 泻、白细胞减少、腹痛、头痛、恶心、呕吐、食欲缺乏、口腔炎、深部静脉血栓 形成、腹内血栓、便秘、上呼吸道感染、剥脱性皮炎、呼吸困难、蛋白尿等。罕 见的严重不良反应有肠梗阻、肠坏死、肠系膜静脉闭赛、吻合处溃疡、低钠血症 等。Avastin用药量375mg/m²，每周1次静脉滴注共4次为1疗程，平均1疗程费 用为10万人民币左右，花费高昂。

2、噬菌体表面随机呈现肽库技术