[发明专利]高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体，特别涉及一种加入了保护剂的高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体及其应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是世界上感染率较高的细菌之一，儿童易感，出现症状就诊时才发现，与慢性胃炎，消化性溃疡，胃腺癌和粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤密切相关，世界卫生组织已将其列为第一类致癌因子，对Hp感染的防治已引起国内外学者的高度关注。临床上现多用抗生素治疗Hp感染，但存在患者依从性差，耐药菌株产生和反复感染等问题，寻找新的防治Hp感染的有效措施来替代抗生素疗法具有重要的临床意义。近年来国内外许多研究已经证实口服卵黄抗体IgY(Immunoglobulinyolk，IgY)可通过被动免疫有效防治消化道感染性疾病。细胞空泡毒素抗原(Vacuolization cytotoxin antigen A，VacA)是Hp引起细胞病变的主要毒力因素，现有技术已能克隆表达Hp的多种毒力因子，如黏附因子、尿素酶、细胞空泡毒素抗原、毒素相关蛋白、中性粒细胞激活蛋白等重组蛋白，制备相应的特异抗体IgY，并通过体内外实验证实了口服特异性IgY防治Hp感染的作用。

但是，口服IgY的应用受到胃肠道内酸和蛋白酶的影响，尤其是胃内高酸和蛋白酶的的生态环境，使IgY的应用受到很大的限制。胃内生态环境最主要的特点是酸性，胃壁细胞，贲门、幽门腺体的分泌液构成胃液，含有盐酸和胃蛋白酶等。Kyong、毛小琴等的研究显示当pH<3时，不加保护剂的IgY液活性显著降低，剩余活性低于50％。当pH＝2时，维持4h，IgY几乎完全失活。由昭红等的研究显示在pH 2.5条件下，IgY对胃蛋白酶非常敏感，活性下降显著。李春晖等的小鼠体内中和试验亦表明胃蛋白酶可影响IgY的中和活性。因此，许多学者对IgY抗酸性和蛋白酶的保护剂进行了探讨。

Shimizu M等通过脱水水化法用脂质体包裹卵黄抗体、Kyong AL等的实验表明高浓度山梨醇(30％以上)在pH3.0条件下可显著提高IgY的稳定性。由昭红等的研究表明10％，30％，50％的蔗糖和30％乳糖均可在胃蛋白酶处理时提高特异性IgY的稳定性。Xiao YL等用pH3.0～6.0壳聚糖-藻酸盐微胶囊包裹口服IgY，将其置于pH1.2的模拟胃液中，IgY释放活性维持于61.36％～74.61％。但这些方法在制作上都较为复杂，且成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种取材方便、简单、经济的高稳定性抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体。

采用的技术方案如下：

一种高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体，其特征是在pH值7.0～7.2的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体中加入了硫糖铝，且硫糖铝的体积百分比浓度为30％～50％。

该产品制备极为简单，仅将两种液态物质按所述的体积百分比浓度进行简单的混合即可直接口服。其中抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体应保持pH值7.0～7.2，如果使用纯化的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体则应该用pH7.0的磷酸二氢钠缓冲溶液将其稀释至限定的PH值。

硫糖铝作为保护剂加入到抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体中。它是含8个硫酸根的蔗糖硫酸酯铝盐，分子量为2086.74，非结晶形式，弱碱性。化学结构式为C₁₂H₃₀Al₈O₅lS_8xAl(OH)₃yH₂O，其硫酸蔗糖部分在碱性的氢氧化铝部分的分子之间交联，形成立体结构的桥形复合物，有显著的黏附性，带负电荷，可与许多带正电荷的化学基团、大分子物质如黏液、糖脂蛋白以及其他蛋白、肽、药物、金属等结合；也可与胃十二指肠黏膜表面的黏液结合形成复合的胶状物，起到黏膜保护作用。硫糖铝遇酸解离之后氢氧化铝凝胶发挥抗酸作用，不仅可缓解强酸环境亦可因此而消除胃蛋白酶的最适酸性环境，并且硫糖铝本身可与胃蛋白酶络合，直接、持续地抑制胃蛋白酶的蛋白分解活性。用硫糖铝作为IgY的保护剂不仅可削弱胃酸、胃蛋白酶对IgY活性的破坏，还可发挥硫糖铝本身对胃粘膜的保护作用。除VacA特异性卵黄抗体外，对其它特异性卵黄抗体也应有同样的保护作用，至今国内外未见用硫糖铝作为口服特异性IgY保护剂的报道。