[发明专利]聚乙二醇类修饰的杀菌/中和内毒素多肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.聚乙二醇类修饰的中和内毒素多肽，由下式组成：

H-BNEP(i-Y-X)-OH

其中，X为平均分子量为6000的单甲氧基聚乙二醇；Y为-COCH₂CH₂CONH-；i为14，代表侧链氨基被修饰的赖氨酸在氨基酸序列中的位数；BNEP为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

2.制备权利要求1所述的聚乙二醇类修饰的中和内毒素多肽的方法，包括以下步骤：

a、母体肽树脂的制备

在合成柱中加入多肽合成树脂，洗涤、溶胀树脂，备用；称取Fmoc-Lys(Boc)-OH或Fmoc-Lys(Y-X)-OH，加入DCM或DCM-DMF混合溶液使其溶解，再加入偶联剂DIC/HOBt/DIPEA活化羧基，转移至合成柱中，与树脂进行偶联反应，反应完毕后除去反应液，充分洗涤树脂，再加入Ac₂O和Py反应以封闭树脂末端氨基，反应完毕后除去反应液，充分洗涤树脂，再取出树脂，真空干燥，制得Fmoc-Lys(Boc)-Resin或Fmoc-Lys(Y-X)-Resin；

在合成柱中加入Fmoc-Lys(Boc)-Resin或Fmoc-Lys(Y-X)-Resin，洗涤、溶胀树脂后，加入浓度为100～500mL/L的哌啶的DMF溶液反应以脱除树脂上氨基的Fmoc保护基，反应完毕后除去反应液，充分洗涤树脂；按照合成多肽的氨基酸序列，称取从肽链C端计第2位的Fmoc-AA-OH，加入DCM或DCM-DMF混合溶液使其溶解，再加入偶联剂DIC/HOBt/DIPEA活化羧基，转移至合成柱中，与树脂进行偶联反应，反应完毕后除去反应液，充分洗涤树脂，再加入浓度为100～500mL/L的哌啶的DMF溶液反应以脱除树脂上氨基的Fmoc保护基，充分洗涤树脂；重复上述“加入羧基被活化的Fmoc-AA-OH-偶联-洗涤-脱除氨基的Fmoc保护基-洗涤”步骤，使肽链从C端逐个向N端延伸直至完成整个肽链的合成，充分洗涤树脂，再取出树脂，冷冻干燥，制得母体肽树脂；

b、PEG类修饰的BNEP的制备

采用固相逐步合成法或液相片段合成法制备：

固相逐步合成法如下：

将肽树脂H-(14-Y-X)-Resin与体积比为90∶5∶3∶2的TFA-PhSMe-TES-PhOMe混合溶液进行裂解反应，制得H-BNEP(14-Y-X)-OH；

液相片段合成法如下：

将肽树脂Fmoc--Resin与体积比为2∶1∶7的TFE-AcOH-DCM混合溶液进行裂解反应，制得Fmoc--OH；将Fmoc--OH与H-Lys(Y-X)-OBzl偶联制得Fmoc-(14-Y-X)-OBzl，以DIC/HOBt/DIPEA为偶联剂；将Fmoc-(14-Y-X)-OBzl与浓度为100～500mL/L的哌啶的DMF溶液反应制得H-(14-Y-X)-OBzl；将H-(14-Y-X)-OBzl与H₂反应制得H-(14-Y-X)-OH，以Pd(OH)₂/C为催化剂；将H-(14-Y-X)-OH与体积比为90∶5∶3∶2的TFA-PhSMe-TES-PhOMe混合溶液进行裂解反应，制得H-BNEP(14-Y-X)-OH；

在上述各化合物的分子式中，X为平均分子量为6000的单甲氧基聚乙二醇；Y为-COCH₂CH₂CONH-；BNEP为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

3.权利要求1所述的聚乙二醇类修饰的中和内毒素多肽在制备中和内毒素药物中的应用。