[发明专利]卵巢功能相关蛋白及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白质，特别涉及一种卵巢功能相关蛋白，还涉及该蛋白的制备方法和用途。

背景技术

卵细胞(又称卵子)是一种特殊、高度分化的细胞。它具有满足它独特功能的细胞器，并能经历一系列发育阶段直至获得与受精相匹配的细胞型。在人类胚胎时期，原生殖细胞(PGCs)经有丝分裂完成卵原细胞增殖，增殖后的卵原细胞(称为初级卵母细胞)进入第一次减数分裂的前期，出生后仍休止在这个时期，以后在性腺未分化细胞的各种信号刺激下，初级卵母细胞生长、分化直至成熟为卵细胞。在这期间，卵细胞需要合成大量独特的蛋白质为受精作准备。因此，对卵细胞特异性基因产物的表达、调控及其相互作用机制的研究一直是生殖领域的重要课题，对于揭示卵子发生、成熟、受精以及早期胚胎发育的机制均有重要意义，在卵巢早衰、排卵功能障碍、不孕等相关疾病的诊断和治疗领域具有重要价值。

哺乳动物卵及早期胚胎发育的分子机制至今未能明确。卵母细胞减数分裂的特征是存在减数第二次分裂(M II期)阻滞且没有分裂间期。1978年，Dekel等提出滤泡细胞的环磷酸腺苷(cAMP)经缝隙连接流向卵细胞抑制减数分裂，黄体生成素(LH)可阻断此通路。近年来，随着对cAMP信号通路，减数分裂抑制状态的维持和减数分裂复苏等相关研究的日益深入，一些较系统的学说逐步形成：(1)蛋白激酶A(PKA)介导的cAMP抑制作用可能在两个水平上发挥：对细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)p34cdc2持久的磷酸化和抑制细胞周期蛋白B(cyclin B)的合成；在LH刺激下，卵细胞内cAMP浓度下降，M期启动因子(MPF)被cdc25B磷酸酶激活，从而启动减数分裂；(2)分裂中期的激活由分裂中期启动复合物/周期素(APC/C)启动，APC/C为泛素连接酶，有至少两种底物(cyclinB和securin)，底物泛素化后可迅速被26S蛋白酶体水解；由于MPF是由催化亚基p34cdc2和调节亚基cyclin B构成，因此，APC/C的启动将导致MPF灭活，使细胞维持在分裂中期；(3)受精时，大量钙离子内流可在三个环节发挥作用：阻断cyclin B和securin的合成、激活APC/C以及调控26S蛋白酶体，卵子减数第二次分裂的抑制状态直到这时才解除；(4)MPF的活性还能刺激mos基因的多聚腺苷酸化，导致mos基因合成和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化。然而有证据表明：(1)在mos基因敲除的小鼠卵细胞内没有发现MAKP在MPF活化中发挥作用；(2)抑制大鼠体内MAPK的作用不能阻止MPF的活化，减数分裂仍可被启动；(3)对蛙卵的研究中发现了不依赖MAKP的MPF活化现象。因此，这一领域的学说仍相当不完善，面临激烈的争论，推测卵细胞内可能还存在未知的APC/C底物。

卵巢包含了人类生命延续的基因库，其功能的正常发挥对物种的遗传和延续有至关重要的作用。在卵巢的特异性基因产物中，参与卵泡成熟和胚胎发育过程者尤其重要，它的调控异常可能导致卵巢早衰、排卵功能障碍、不孕，甚至肿瘤等多种疾病。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种如下(a)或(b)的卵巢功能相关蛋白：

(a)由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与(a)限定的蛋白质具有相同或相似活性的由(a)衍生的蛋白质。

本发明的目的之二在于提供编码所述卵巢功能相关蛋白的基因。

进一步，所述基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

进一步，所述基因在严格条件下可与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列杂交。

本发明的目的之三在于提供含有所述基因的重组表达载体。

本发明的目的之四在于提供含有所述重组表达载体的转化体。

本发明的目的之五在于提供制备所述卵巢功能相关蛋白的方法，包括以下步骤：

(a)转化体的培养

扩大培养所述转化体；

(b)转化体的诱导表达

取步骤(a)所得转化体的扩大培养液，加入异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达，离心收集细胞，溶解细胞，离心收集上清液；

(c)表达产物的纯化

将步骤(b)收集的上清液进行纯化，即得卵巢功能相关蛋白。

本发明的目的之六在于提供抗所述卵巢功能相关蛋白的抗体。

本发明的目的之七在于提供所述卵巢功能相关蛋白在制备由于该蛋白功能低下、缺失或亢进所致疾病的诊断试剂中的应用。