[发明专利]云南水稻老品种籼粳鉴定的分子技术方法

权利要求书

1.一种云南水稻老品种籼粳鉴定的分子技术方法，其步骤是：

1)将待鉴定材料种子5粒于20-35℃发芽；

2)发芽5天取叶片，提取水稻总DNA；

3)测定样品DNA浓度并将DNA定量稀释为25ng/ul；

4)用依照水稻第10染色体特定长臂区段的序列设计的特异性引物JI进行PCR反应；特异性引物JI序列为：F：AAGAAGGGAGGGTTATAGAATCTG，

                R：ATATCAGGACTAACACCACTGCTC；

5)用含EtBr0.1ug/ml的2％琼脂糖凝胶电泳分离；

6)在紫外透射仪上检测PCR扩增产物及电泳结果；

7)用JI作引物，云南水稻老品种籼稻材料的PCR有两个产物，分子量分别是280bp、380bp；云南水稻老品种粳稻材料PCR有一个产物，分子量为280bp，由此鉴定云南水稻老品种材料籼粳类型。

2.根据权利要求1所述的一种云南水稻老品种籼粳鉴定的分子技术方法，其特征是所述PCR扩增反应的反应液组成及扩增程序为：

反应液组成：反应总体积为12.5ul，含ddH₂O 8.95ul，模板DNA 1ul，引物各1.6pmol，1×buffer，60uM dNTP，0.5U Taq酶，1.8mM MgCl₂；

扩增程序：94℃4min；

          94℃50s、58℃50s、72℃1min，38个循环；

          72℃4min。