[发明专利]月季耐盐株系的离体快速筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及月季耐盐株系的离体筛选与快速增殖的方法。

背景技术

月季(Rosa cvs.)是世界花卉市场上最重要的切花种类之一。在荷兰切花拍卖额中，月季连续多年排名第一，居世界四大切花之首，同时月季也是我国乃至云南省的第一大切花，是切花种类中的重中之重，创造出巨大的经济效益。但在月季的栽培和生产过程中，耐盐性已成为制约切花月季品质和产量提升的关键因素之一，且当前切花月季的栽培模式多为设施栽培，在连作模式下的生产，造成温室土壤盐分积累逐年递增，使月季在高盐基质下的产量降低，影响了丰产性。

前人的研究表明培育耐盐品种是解决土壤盐渍化问题的关键。常规耐盐性筛选常采用幼苗或植株等材料进行田间筛选，使经物理或化学等诱变后的组培无性系再经长期增殖、生根、移栽成活后形成一定数量的幼苗后，才能进行田间筛选；若筛选出耐盐突变株则还需再通过组培、扦插或嫁接等方式进行扩繁，存在时间周期长，不利耐盐突变株系的快速筛选及大量增殖，加之土地和劳动力成本较高，需耗费更多的人力与物力。

目前，耐盐品种培育的新技术方面常有：(1)体细胞无性系的变异及筛选：在组织培养过程中，由于培养条件的变化，如植物激素、添加甲基磺酸乙酯等化学诱变剂、射线处理等物理诱变等方法使植物体产生突变。例如：中国专利，专利号为ZL0311539.8的“番茄耐盐性状的筛选”，中国专利，专利申请号为200610118700.6的“一种利用组织培养筛选耐盐番茄的方法”，中国专利，专利号为ZL03150784.0的“耐盐性番茄植株培育方法”，均是将材料在含有不同浓度NaCl的培养基中培养，选择出抗盐的变异植株。(2)组织培养结合射线辐照处理诱发突变体：如郑海柔等，“酸枣组织培养结合⁶⁰Co-γ射线辐照诱发突变体”，上海农业学报，2004，20(1)：13-18。王磊的“丰花月季组培苗辐射诱变研究及遗传变异研究”，东北农业大学硕士毕业论文，2007。

现有技术存在以下缺陷：(1)在体细胞无性系的变异及筛选中还没有对切花月季这一大花卉种类进行耐盐株系的离体快速筛选研究，如上述专利。(2)在组织培养结合射线辐照处理诱发突变体研究中，如王磊的“丰花月季组培苗辐射诱变研究及遗传变异研究”(东北农业大学硕士毕业论文，2007)，重点是用组织培养材料在辐射剂量的研究和利用RAPD技术在早期对月季辐射后代进行鉴定和选择研究上，并未利用组织培养技术对月季辐射后代的耐盐筛选进行研究。郑海柔等的“酸枣组织培养结合⁶⁰Co-γ射线辐照诱发突变体”(上海农业学报，2004，20(1)：13-18)中除所选作物不同外，在组织培养结合⁶⁰Co-γ射线辐照诱发突变体中也未有针对性地进行耐盐株系的筛选。

目前，将⁶⁰Co-γ射线等物理诱变与耐盐选择压力结合进行月季耐盐株系离体筛选的研究还未见报道，将⁶⁰Co-γ射线等物理诱变与耐盐选择压力结合对月季耐盐株系的离体快速筛选的研究也还未见报道。

发明内容

本发明的目的是解决月季品种选育周期长，杂交选育2年才能开花以及田间耐盐性筛选易造成土壤盐滞化的问题，提供一种月季耐盐株系的离体快速筛选方法。

本发明克服了现有技术中(1)传统月季耐盐品种筛选中土地和劳动力成本较高、周期较长的局限；(2)在已报道的耐盐性筛选技术中还没有针对月季的方法，而其它作物耐盐选择压力的浓度并不适应于月季种类；(3)在组织培养结合辐照处理诱发突变体的研究中，存在未利用组培的离体筛选技术对月季辐射后代的耐盐筛选进行研究等缺陷。因此，本发明在利用成熟组织培养技术的基础上，创新地将⁶⁰Co-γ射线物理诱变与⁶⁰Co-γ射线物理诱变之前的组织培养技术和⁶⁰Co-γ射线诱变之后的耐盐选择压力有机结合，以对月季耐盐株系进行离体筛选，重点研究了耐盐突变株系的离体筛选、继代增殖、壮苗、生根、移栽等关键技术，本发明通过多年的探索，成功地研究出在短时间内可获得一定数量的变异植株，适合于选育周期长的木本花卉如月季耐盐株系的离体快速筛选，成功建立起月季耐盐株系的离体快速筛选方法，以满足月季产业化应用及可持续发展的需求。本发明各步骤的效果好，各步骤之间具有系统性、整体性，大幅提高了变异率，为月季耐盐新品种的选育提供了一种新的思路和方法。

本发明与现有技术相比，有以下有益效果：