[发明专利]猪源大肠杆菌中抗铜基因pcoD的PCR检测方法

权利要求书

1、一种用PCR检测猪源大肠杆菌中抗铜基因pcoD的方法，其特征在于该方法包括：用于PCR检测的猪源大肠杆菌单菌落培养物的制备、抗铜基因pcoD的引物序列、PCR反应液组成、PCR扩增反应条件、及PCR扩增产物的检测方法。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的用于PCR检测的猪源大肠杆菌单菌落培养物的制备为：将分离到的待检测的猪源大肠杆菌菌株划线接种在牛肉膏蛋白胨培养基平板上，37℃培养18-36h，得到单菌落。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的抗铜基因pcoD的引物序列为：上游：5’GATATCTGACTCCCTGGC3’；下游：5’CCGTAAAATCAAAGGGCT3’。

4、如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于所述的PCR反应液组成为：10x PCR buffer，10μM上游引物序，10μM下游引物序，10μM dNTP用一个无菌的0.5-10μL移液枪头挑取一个单菌落作为DNA模板放入PCR反应液中混匀，1.5-3.0U Taq酶，反应体系20-50μL。

5、如权利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于所述的PCR扩增反应条件包括：94℃预变性5-10min；94℃变性1.75min、55℃退火1.75min、72℃延伸2min、共进行30-35个循环；72℃延伸10min，于4℃下保存。

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于将扩增产物于0.8-2.0g/L的琼脂糖凝胶电泳检测及UV I凝胶成像分析结果。