[发明专利]产紫杉醇枝状枝孢霉菌及用其制备紫杉醇的方法

权利要求书

1.一种产紫杉醇枝状枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)，其保藏号为CCTCC No.M208208。

2.一种利用权利要求1所述产紫杉醇枝状枝孢霉发酵制造紫杉醇的方法，其特征在于：在培养基中培养产紫杉醇枝状枝孢霉菌株以在其细胞内和培养基中聚集紫杉醇后，从其细胞内和培养基中提取紫杉醇。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，该方法具体包括下述步骤：

(1)将产紫杉醇枝状枝孢霉菌株接种在PDA培养基平板上，25℃～28℃静置培养10～15天后，加入灭菌的蒸馏水，通过玻璃棉过滤器过滤收集孢子，用无菌生理盐水洗涤3～5次，然后用无菌生理盐水稀释至10⁶～10⁸个孢子/ml的数目；

(2)按每300～500ml液体发酵培养基接种1～5ml产紫杉醇枝状枝孢霉菌株的孢子悬液，将产紫杉醇枝状枝孢霉菌株接种到液体发酵培养基中，在20～30℃、pH4.0～8.0、需氧条件下发酵培养10～15天后，分别收集菌丝体和发酵液；

(3)菌丝体在45℃～50℃条件下烘干，然后研磨粉碎，过200目筛子收集细粉，每1.0g细粉用6ml甲醇/氯仿抽提3～5次，合并所有抽提液，甲醇/氯仿的体积比为1∶0～1∶1；

(4)发酵液用氯仿振荡抽提3～5次，发酵液与氯仿的体积比为1∶1～3∶1，合并所有抽提液；

(5)将步骤(3)和(4)中得到的抽提液分别在45℃～50℃条件下减压蒸馏回收溶剂，并将蒸馏回收溶剂后的残余物质溶解在适量的100％甲醇中，即获得紫杉醇粗提溶液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述液体发酵培养基按下述配比制备：葡萄糖100g，酵母粉15g，蛋白胨6g，KH₂PO₄ 5g，MgSO₄·7H₂O ₃g，苯甲酸钠15mg，苯丙氨酸25mg，丝氨酸5mg，甘氨酸15mg，水杨酸25mg，加入适量蒸馏水溶化后，用蒸馏水定容至1升。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，发酵的优化条件为：在初始pH为5.0的300ml液体发酵培养基中，接种1ml浓度为10⁸个孢子/ml的产紫杉醇枝状枝孢霉菌株的孢子悬液，220rpm、28.0℃条件下恒温发酵培养14天。