[发明专利]从精浆中提取胞外RNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及RNA的提取方法，尤其涉及从精浆中 提取游离RNA的方法。

背景技术

胞外RNA是存在于细胞外的RNA，近年来被认为在基因表达研究、疾病诊断、 法医鉴定等方面有很好的应用前景[参见：Vlassov VV，Laktionov PP，Rykova EY.Extracellular nucleic acids.Bioessays 2007，29：654-67]。精液是生 殖系统多个器官共同分泌和排除液体的混合物，是进行生殖系统疾病诊断的重 要标本[参见：熊承良，主编.《临床生殖医学》.人民卫生出版社.2007. p23-8]。

目前，研究和检测男性生殖系统器官(如睾丸、前列腺、精囊腺等)的某 些基因的表达，及临床诊断某些男性生殖系统疾病，如肿瘤、睾丸精子发生情 况，都依赖于穿刺，穿刺的有创性和不易接受性，在很大程度上限制了对生殖 系统器官基因表达分析的研究和应用。

胞外RNA是指存在于细胞膜外的RNA，一般认为来源于细胞死亡后释放 或活细胞分泌至胞外(图2)[参见：Fleischhacker M，Schmidt B.Circulating nucleic acids(CNAs)and cancer-A survey.Biochim Biophys Acta 2007. 1775：181-232]，并可能与其他物质结合[参见：Park NJ，Li Y，Yu TW，Brinkman BM，Wong DT.Characterization of RNA in saliva.Clin Chem 2006. 52：988-94]，增加其稳定性[参见：Zubakov D，Hanekamp E，Kokshoorn M，et al.Stable RNA markers for identification of blood and saliva stains revealed from whole genome expression analysis of time-wise degraded samples.Int J Legal Med 2008，122：135-42]，逃脱RNA酶的降解作用。国 外对胞外RNA的研究开始于1999年，两个小组在肿瘤患者外周血血浆中检测肿 瘤来源的RNA[参见：Lo KW，Lo YMD，Leung SF，et al.Analysis of cell-free Epstein-Barr virus associated RNA in the plasma of patients with nasopharyngeal carcinoma.Clin Chem 1999，45：1292-4；Kopreski MS，Benko FA，Kwak LW，et al.Detection of tumor messenger RNA in the serum of patients with malignant melanoma.Clin Cancer Res 1999，5：1961-5]。目 前，对于胞外RNA的研究成为一个新的热点，除外周血血浆外，已在唾液、支 气管灌洗液、尿液中发现有胞外RNA的存在[参见：Li Y，Zhou X，John S，et al.RNA profiling of cell-free saliva using microarray technology.J Dent Res 2004，83：199-203；Schmidt B，Carstensen T，Engel E，et al.Detection of cell-free nucleic acids in bronchial lavage fluid supernatants from patients with lung cancer.Eur J Cancer 2004，40：452-60]，其中以血浆 和唾液中胞外RNA研究相对较多。由于胞外RNA对其来源器官基因表达的全面 代表性，分子生物学技术的快速、敏感而准确，及其快速发展趋势和前景，胞 外RNA被认为在疾病诊断、法医鉴定、产前诊断等方面有很好的应用价值[参见： Vlassov VV，Laktionov PP，Rykova EY.Extracellular nucleic acids. Bioessays 2007，29：654-67]。