[发明专利]一种重组复制缺陷型腺病毒载体H5N1亚型流感基因工程疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及重组基因工程疫苗，具体地，本发明涉及一种用于预 防动物H5N1亚型流感的重组基因工程疫苗，更具体地，本发明所涉 及的疫苗以H5N1亚型流感毒株糖蛋白HA作为抗原基因，以E1、 E3联合缺失的复制缺陷型人腺病毒为载体。本发明还涉及该疫苗的 HEK293细胞病毒培养物。

背景技术

高致病性H5N1亚型禽流感是危害世界养禽业发展的重要疾病， 可导致感染禽群100％的死亡，被世界动物卫生组织列为I类烈性传 染病。禽流感的广泛传播与流行给世界养禽业造成严重损失，H5N1 亚型流感病毒感染人并且致人死亡事件的出现，引起了国际粮农组 织、世界卫生组织和世界各国政府及人民的高度关注。

用流感疫苗进行免疫是预防和控制H5N1亚型流感发生的有效 途径之一。H5N1流感病毒疫苗现在仍然广泛采用以鸡胚进行生产， 这些疫苗虽然有较好的免疫效果，但存在生产成本昂贵、且运输和贮 存必须依赖于低温＂冷链＂，给药方式单一且在流感大流行时受到鸡胚 供应的限制等因素的限制。

有效免疫接种，消除H5N1亚型流感病毒的传染源与切断传播途 径，有赖于发展新一代H5N1亚型的基因工程重组疫苗。联合缺失腺 病毒早期区基因E1和E3的重组复制缺陷型腺病毒具有宿主范围广， 对外界环境有一定的抵抗能力，可免疫途径多样等优点，具有作为基 因工程H5N1亚型流感毒疫苗的优良载体的潜力。而且，这种E1和 E3联合缺失的重组复制缺陷型腺病毒还具有一个突出优点：由于E1 和E3区编码多种与对抗机体免疫防卫有关的蛋白质，联合缺失这两 个区域的重组病毒疫苗可望更有效地刺激免疫应答，并成功地克服在 新生动物中可能存在的来自于母体的免疫干扰。研究和开发基于复制 缺陷型腺病毒的重组流感病毒疫苗将有望有效预防、控制H5N1亚型 流感的流行并为预防新的流感大流行提供物质储备。

本研究所对获得表达H5N1亚型流感病毒HA基因的重组复制缺 陷型腺病毒进行了免疫效力评估，表明了其应用潜力。

以腺病毒载体进行动物疫苗的研究，其优势在于：(1)病毒粒子相 对稳定，安全性较好；(2)腺病毒基因组较大(36Kb)，切除致瘤部分〔如 E1、E3)区后，可以插入相当大的外源基因；(3)病毒感染的宿主细胞 极为广泛，而且由于它是DNA病毒，不会受其它RNA信息的干扰。 不依赖宿主细胞增殖；(4)腺病毒载体很容易将外源基因直接转移到靶 细胞中，并使其在细胞内有效表达成活性蛋白；(5)重组腺病毒的靶细 胞是分裂或者不分裂的细胞，且含有目的基因的重组腺病毒DNA是 游离于细胞基因组外的(不整合入宿主基因组)，目的蛋白可得到瞬 时的高水平表达。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于预防动物H5N1亚型流感的重组 疫苗，这种疫苗的疫苗种毒是以H5N1亚型流感毒株 A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)糖蛋白HA作为保护性抗原的E1、 E3联合缺失的复制缺陷型重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP。

本发明提供的用于预防动物H5N1亚型流感的重组疫苗，其特征 在于以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人腺病毒为载体，以整合腺病 毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，在载体E1区携带有H5N1 亚型流感病毒膜糖蛋白编码基因HA基因。

本发明提供的用于预防动物H5N1亚型流感的重组疫苗中的E1 区还进一步携带用于筛选重组病毒的绿色荧光蛋白示踪基因EGFP。

本发明提供的用于预防动物H5N1亚型流感的重组疫苗中的HA 基因是来自于流感病毒株A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的免疫原 性基因。