[发明专利]一种蛹虫草菌种分离保藏方法

说明书

技术领域

本发明属于蛹虫草栽培技术领域，涉及蛹虫草菌种及遗传特性 保持的方法。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militaris(L.Fr)Link)，又名蚕虫草、北冬虫 夏草，属子囊菌门(Ascomycota)、核菌纲(Pyrenomycetes)、球壳 目(Sphaeriales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps (Fr.)Link)真菌。蛹虫草是虫草属真菌的模式种，在自然界多寄 生在多寄生在多种鳞翅日昆虫的幼虫和蛹上。

近年来，很多研究都表明，人工栽培的蛹虫草化学成分及药理 作用与冬虫夏草相似，但价格却远远低于冬虫夏草，因此，蛹虫草 的开发应用具有极大的潜在市场。人工培养蛹虫草是解决野生虫草 来源不足的良好途径，相关的研究很多，然而人工培养过程中菌种 退化现象严重是制约产业化开发的一大瓶颈。影响人工培养蛹虫草 菌种退化的因素很多，简单的可以分成两的大类，一类是菌株的遗 传特性造成菌种的退化(内因)。一类是培养条件、操作环节、环境 因素导致的菌种退化(外因)。

人工培养蛹虫草要得到子实体，先决条件是这个蛹虫草菌株要 有形成子实体的能力，不同菌株所具备的遗传背景是不一样的，所 以它们具备形成的子实体的能力有差异。然而，在实际生产中，即 使是优势蛹虫草菌株，随着菌种传代、转接次数的增加或保藏时间 的延长，菌种资源极易退化。

蛹虫草菌种退化的形态表现为：角变现象增加；菌丝长势变弱， 子实体原基的产生减少，培养周期越来越长，菌丝易老化；菌丝体 色素变弱，甚至没有色素的产生，子实体产量显著减少且品质改变 等。在生产上通常蛹虫草菌种转管次数不宜超过3次(俞孕珍， 1995)。

蛹虫草菌种退化后表现在子实体上为产量和品质下降，畸形率 上升，甚至不分化子实体原基(王升厚，1998)。

在实际的蛹虫草规模化生产的菌种分离和筛选过程中，最常采 用的是组织分离法。组织分离法就是指通过子实体组织分离获得纯 菌丝的方法。食用菌的子实体实际上就是菌丝体的纽结物，它具有 很强的再生能力。因此，只要切取一小块子实体组织，把它移植到 培养基上，就能获取纯粹的菌丝体。

组织分离培养，从生物学的角度来看，乃是一种无性繁殖，是 从组织—菌丝—组织—菌丝周而复始的循环过程，遗传变异小，但 在无性繁殖过程中可能产生自然变异和突变，但组织分离产生的变 异不很大，是一种累积、渐进的过程，变异是绝对的，稳定是相对 的。组织分离法还会因取样时子实体发育的不同时期和部位，以及 个人的经验和技巧而产生不同的结果。

组织分离法取样位置不同遗传特性产生区别的一个典型事例 是：香菇同一菌种子实体菇肉、菇柄组织分离物与菌丝体间既保持 了遗传物质相对稳定性和遗传性状的稳定性(DNA相似性在88％以 上)，存在着相对的遗传变异，虽然变异极为细微，但是预示着一 种潜在必然趋势，反映了累积、渐进的漫长过程，这是由于内、外 因造成的，但主要是由于遗传型的变异造成的，育种工作者不应忽 略这种变异的存在，因为这很可能是造成某些菌种退化和变异的原 因所在。(香菇子实体组织分离物与菌丝体的遗传相关性上海农 业学报1997，13(4)：85～88)

孢子分离法是利用食用菌成熟的有性孢子即担孢子、子囊孢 子，无性孢子即厚垣孢子、节孢子、粉孢子等萌发成菌丝，来获得 纯菌种的一种方法。由于孢子的数量大，变异的机会多，因此采用 孢子分离法，可以有更多选择优良菌株的机会，而且孢子的生活力 强，所得菌种菌龄小，生活力旺盛。但是有些食用菌的担孢子不易 萌发成菌丝，还有些食用菌的孢子有两种或四种极性，单孢分离的 菌株有时不产生子实体，必须经过交配，得到结实性的双核菌丝， 才能用于产生。故孢子分离法又有单孢分离法和多孢分离法两种。

单孢分离法是指每次只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获 得纯菌种的一种方法。多孢分离法就是把许多孢子接种在同一培养 基上，让它们萌发，自由交配来获得食用菌纯菌种一种方法。