[发明专利]一种抗微囊藻毒素的单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种抗微囊藻毒素的单克隆抗体的重链和轻链可 变区基因序列及其应用。

背景技术

微囊藻毒素(microcystins，MC)是水华发生时水体中蓝藻爆发性繁殖产生的次生代谢产 物。MCs是一个结构相似的环七肽家族，目前在淡水中已发现80多种不同的MCs(WHO， 2004)，其中MC-LR是目前已知的毒性最强的、急性危害最大的一种淡水蓝藻毒素(Sivonen， 1996；韩志国等，2001)。MC-LR是一种肝毒素，这种毒素是肝癌的强烈促癌剂，能导致肝坏 死、出血或凋亡(Liu等，2000)。

近年来水华频繁出现，面积逐年扩散，我国太湖、滇池、巢湖、洪泽湖都时有发生，严重 威胁着生态安全和人类的饮水安全，因此，对水体中微囊藻毒素进行及时准确的监测非常重 要。如何建立一种简单、快速、灵敏度高的检测手段，以便采取适当措施减少危害，是目前 迫切需要解决的问题。传统检测方法中大多采用HPLC、LC/MS、GC等方法检测水体中微囊 藻毒素，这些方法不仅步骤复杂，仪器设备也较昂贵，并不不适合广泛实时的应用。而免疫 分析法以其价格低廉，灵敏度高，可操作性强成为一项值得推广应用的检测技术，免疫检测 是基于抗原-抗体特异性反应的检测方法，在检测水体中的微囊藻毒素方面，由于其检测速度 快，费用低廉而适合大规模样品的快速筛选；其高特异性高灵敏度对于预警检测方面有很广 阔的应用前景。

免疫检测整体上是一种理想的检测方法，其关键在于获得特异性和结合亲和力良好的抗 体，特别是单克隆抗体。微囊藻毒素这类小分子有机污染物，属于半抗原物质，其免疫原性 很弱或者没有免疫原性，即直接以其免疫动物时，很难大量获得或者根本不产生的抗体，必 须要载入到大分子载体物质中，才能成为完全抗原；即使获得符合标准的抗体后，这种抗体 的大量生产制备也是一项昂贵费时的工作，一言以蔽之，利用免疫检测方法检测水体中微囊 藻毒素，目前为止抗体的大量制备仍然是一个难题。

随着基因工程技术的发展起来的重组抗体技术为这个难题的解决带来了福音，重组抗体 技术是将单克隆抗体的抗原活性识别区域的基因拼接起来，克隆到常用载体中转化微生物， 利用微生物生产单链抗体，这些单链抗体具备原单克隆抗体的抗原结合活性，McElhiney J. 等从人噬菌体体库中筛选出一株抗MC-LR单链抗体，能够检测出低于世界卫生组织所规定 饮用水标准的指导值(1μg/L)^[9]，因此单链抗体的检测灵敏性得到证实。而重组抗体技术生 产单链抗体比传统的单克隆抗体制备方法简单、经济、周期短，因此是免疫检测技术运用中 的一项理想的辅助技术，在抗微囊藻毒素的单链抗体制备中有广阔的运用前景。

发明内容

本发明针对上述领域中的缺陷提供一种抗微囊藻毒素的单克隆抗体的重链和轻链可变区 基因及其应用，为微囊藻毒素抗体制备提供了简便、经济的途径。

一种抗微囊藻毒素的单克隆抗体的重链可变区基因，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示的 序列。

上述重链可变区基因编码的多肽，其氨基酸序列如Seq ID No.5所示。

一种抗微囊藻毒素的单克隆抗体的轻链可变区基因，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示的 序列。

上述轻链可变区基因编码的多肽，其氨基酸序列如Seq ID No.6所示。

一种单链抗体的基因，其特征在于：包括上述如Seq ID No.1所示的重链可变区基因序列 和如Scq ID No.2所示的轻链可变区基因序列。

上述单链抗体的基因，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示。

上述单链抗体的基因序列编码的多肽。

上述多肽的氨基酸序列如Seq ID No.4所示。

包含所述单链抗体的基因序列的表达载体pET-MC。

扩增上述重链基因序列的简并引物和特异性引物，

简并引物HFR1：5′-SAR G TN MAG CTG SAG SAG TCW GG-3，

特异性正向引物V_H-B：5′-GGG AAT TCC ATA TGG AGG TTA AGC TGC AGG AGT C-3′，