[发明专利]含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及的是一种生物制剂，以人ARMET(Arginine rich，mutated in earlystage of tumors，亦称ARP、MANF)基因为基本要素而衍生的具有生物活性的生物制剂，包含以重组的ARMET蛋白或寡核苷酸(siRNA或miRNA)为主要活性成分，选择适当的辅料和合理的剂型制成的生物制剂及用途。

背景技术

ARMET(Arginine rich，mutated in early stage of tumors)在公共数据库中也被称为ARP(arginine-rich protein)或MANF(mesencephalic astrocyte-derivedneurotrophic factor)，其氨基酸序列见图1。最初的研究发现，该基因在早期肿瘤中有单个核苷酸突变(Shridhar et al，1996 a and 1996 b)，而随后的研究却发现，ARMET基因中出现的这种突变属于正常基因的多态性，而非肿瘤所特有(Evronet al.，1997；Tanaka et al.，2000)。这一研究结果使人们一度失去了对ARMET的研究兴趣。但Petrova及同事在体外传代的大鼠中脑星形胶质细胞的培养液中分离得到的神经营养因子MANF，其人类的同类物就是ARMET(Petrova et al.，2003)，分子量在20kD左右。他们的研究并发现，重组的人ARMET可选择性地作用于体外培养的多巴胺能神经元，促进其存活，在低剂量时作用优于神经营养因子GDNF和BDNF(Petrova et al，J Mol Neurosci 2003)。2007年《Nature》上的一篇报道格外引人注意，该研究发现，含保守序列的多巴胺能神经元营养因子(Conserved Dopamine Neurotrophic Factor，CDNF)对多巴胺能神经元有保护作用(Paivi Lindholm et al，Nature 2007)。而CDNF是ARMET(MANF)的同类物，都属于含8个半胱氨酸保守序列的蛋白家属，且ARMET与CDNF的氨基酸同源性为59％。

到目前为止，与ARMET相关的报道很少，其中早期的(90年代中期)的硬究主要是是关于它在早期肿瘤中的单基因突变；另外，还有关于它与内质网应激的关系；有关对多巴胺能神经元影响的报道(J Mol Neurosci 2003；Neuroreport2006)；还有关于它的类似物CDNF对中脑多巴胺能神经元的保护作用(Nature2007)。这些研究均零星地散布于世界上几个实验室，到目前为止还没有市售的商品化的ARMET蛋白和相关制剂。

发明内容：

本发明的目的是提供一种含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂及用途，具有显著的神经保护作用、抗关节炎症作用及抗肿瘤作用。

本发明的技术方案如下：

含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂，其特征在于：其中至少含有人ARMET蛋白或它的干扰性寡核苷酸(siRNA或miRNA)作为其活性成分。

所述的含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂，其特征在于：所述的寡核苷酸的RNA序列可以为：siRNA1：GGA CCU CAA AGA CAG AGA UTT(sense)，siRNA2：GCA GAU CGA CCU GAG CAC ATT(sense)。

所述的含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂，其特征在于：其中可能还含有其它药用活性成份，或/和药学上能接受的辅料。

所述的含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂的用途，其特征在于：用于神经保护、抗关节炎症及抗肿瘤等的治疗药物。

所述的含有人ARMET蛋白或寡核苷酸活性成分的生物制剂的用途，其特征在于：在治疗神经系统疾病包括脑的缺血性损伤方面的应用；在抑制增生性滑膜炎，如类风湿性关节炎、骨关节炎等方面的应用；在治疗肿瘤方面的应用。

本发明是基于对人ARMET蛋白或它的干扰性寡核苷酸的以下研究工作。

一、重组人ARMET的神经保护作用

(1)重组人ARMET促进原代培养的神经元的增殖：原代培养的神经元中加入重组的人ARMET 0.5μg/ml，同时用等量的BSA和原核表达的人tau蛋白作为对照，连续培养7d。结果发现ARMET不仅能促进神经元的生长，同时促进其增殖，并有集落形成(图2)。