[发明专利]法氏囊五肽、其衍生肽及其应用

说明书

一、技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种具有免疫调节活性和抗氧化活性的法氏囊五肽、其衍生肽及其应用。

二、背景技术

现有技术：生物活性肽(Biologically active peptides，BAP)指的是一类分子量小于6000D，具有多种生物学功能的多肽。其分子结构复杂程度不一，可从简单的二肽到环形大分子多肽，而且这些多肽可通过磷酸化、糖基化或酰基化而被修饰。活性肽的种类很多，在动物体内广泛存在，并且具有重要的生理学功能，从具有免疫调节、抗氧化、类激素、类抗生素到调味及改变饲料味觉等功能。如免疫活性肽不仅能增强机体的免疫能力，在动物体内起重要的免疫调节作用；而且还能刺激机体淋巴细胞的增殖和增强巨嗜细胞的吞噬能力，提高机体对外界病原物质的抵抗能力。再如抗氧化肽具有较强的抑制生物大分子过氧化和清除体内自由基的功能。生物活性肽在机体内含量甚微，代谢快，很容易降解，因此，对于新的活性肽的获得及生物活性的检测具有一定的困难。近年来，随着各种高灵敏多肽分离纯化、定量技术的应用，新的活性肽不断被发现，对活性肽的分布与功能的认识不断加深。新的活性肽的研究取得迅速发展。

免疫系统的基本功能是保护机体免于疾病的侵害。这些疾病不仅包括由于细菌、病毒及其他病原体引起的疾病，同时也包括癌症以及由于免疫失调自身免疫紊乱导致的疾病。免疫系统包括参与免疫应答的各种器官、组织细胞和免疫效应分子。胸腺和法氏囊是中枢免疫器官。胸腺不仅是T细胞分化、发育和成熟的场所，而且还可以分泌多种胸腺激素、调节机体的免疫功能，特别是细胞免疫功能。1966年Goldestein等从小牛胸腺中提取了具有生物学活性的物质，命名为胸腺素(thymosin)。之后，相继有文献报道了纯化胸腺激素的方法，先后分离出胸腺素a1(thymosin alpha 1)、胸腺素β(thymosinbeta4)、血清胸腺因子(thymulin)等多种具有有免疫生物学活性的蛋白和多肽因子。胸腺激素在疾病诊断和治疗中有重要的作用，现已广泛应用于治疗乙肝、丙肝、肿瘤、癌症和免疫缺陷等的研究中，是一类免疫增强剂或免疫调节剂。法氏囊是禽类的特有免疫器官，是细胞发育分化和成熟的场所，法氏囊除具有中枢免疫器官的地位外，还作为外周免疫器官发挥作用。而对于与胸腺具有相同地位的法氏囊免疫活性因子的研究不多。1960年Glick报道，法氏囊(BF)粗提物用丙酮处理后，多次注射去除BF的仔鸡，可使其恢复产生抗体的能力。1972年Toivanen等报道，给去除BF的雏鸡注射鸡胚干细胞后，可使其恢复体液免疫的能力。1976年Baba等报道，17日龄摘除BF的雏鸡连续注射5天法氏囊提取也能有效恢复对牛血清白蛋白(BSA)的抗体生成能力。1976年Brand等报道在外用鸡BF提取物诱导新生鸡骨髓淋巴细胞的分化，对T、B淋巴细胞分化都有诱导作用，提示可能存在一种淋巴细胞分化激素---bursopoietin。1977年Baba报道丙酸睾酮(TP)可以制鸡法氏囊发育，产生抗体多为IgM，而法氏囊提取物可恢复抗体水平，促使抗体类型由IgM向IgG转化。1986年Audyha首次利用各种层析技术从法氏囊中分离到一种物质Bursin，是一种三肽，其氨基酸组成顺序为Lys-His-Gly-NH₂，它可诱导哺乳动物和禽类B细胞的分化，提高人Daudi B细胞中的cAMP和cGMP水平。1991年郑昌学等报告，北京鸭法氏囊提取物能显著提高小鼠脾脏空斑形成细胞(PFC)的数量，对淋巴细胞抑制剂环磷酰胺具有明显的拮抗作用，并从法氏囊提取物中进一步分离到一种分子量小于750Da的肽类物质。1992年Murthy等报道，大剂量的法氏囊组织提取物在体外可以促进PHA诱导的淋巴细胞的转化，并确信是囊素之外的物质在起作用。

从生物体提取具有免疫活性或免疫调节作用的活性肽的文献很多。如美国专利：6337093，发明人申请了从昆虫体内提取具有免疫调节和抗菌作用的活性肽的专利。WO96/04005发明人申请了组药用复合物专利，该组药用复合物的主要成分是从山羊、猪、牛肝等组织中提取的一种具有激活主要组织相同性抗原、增强免疫反应的多肽。胸腺五肽(Thymopentin)是胸腺生成素(Thymopoieti，43肽)种氨基酸序列32-36的五肽，商品名日达仙，作为一种免疫因子已应用于医学临床，在抗感染、抗肿瘤、免疫缺乏症的治疗上获得可喜成果。