[发明专利]一种定点删除转基因细胞中的外源基因的方法有效
| 申请号： | 200810246596.8 | 申请日： | 2008-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN101760473A | 公开（公告）日： | 2010-06-30 |
| 发明（设计）人： | 王少华;丁方荣;孙秀柱;戴蕴平;李宁 | 申请（专利权）人： | 北京济普霖生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;G01N15/10;C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 100193 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定点 删除 转基因 细胞 中的 基因 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种定点删除转基因细胞中外源基因的方法，其包括如下步 骤：将表达载体pcre-IRES EGFP导入目的细胞，该目的细胞含有 LoxP-Nn-LoxP结构，Nn为序列长度为n的外源基因；所述外源基因 为标记基因neo；所述目的细胞为转基因动物细胞；流式细胞仪分选 表达荧光蛋白的细胞，进一步培养分选出来的细胞，按照500个细胞 /100mm培养皿的密度接种细胞，并采用单克隆点细胞PCR法鉴定阳 性细胞，所用上游引物为SM-14：AACCTACTCGAGATAACTTC， 下游引物SM-1922：GATGGTCGATAGATAACTTC，阳性PCR产物 为1.9kb，取没有扩增出1.9kb条带的细胞进行核移植，并进行单囊 胚PCR鉴定，以验证所移植的细胞不含Nn、GFP和Cre酶基因序列。
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