[发明专利]喷鼻免疫流感多价疫苗的制备及其方法

权利要求书

1.一种喷鼻免疫流感多价疫苗，其特征在于该喷鼻免疫流感疫苗包含稳定剂、抗生素和流感多价疫苗抗原；每0.2ml喷鼻免疫流感疫苗中，稳定剂含0.01-0.20％w/v的谷氨酸盐，1.0-4.0％w/v的明胶，1-4％w/v的精氨酸，5-10％w/v的蔗糖，0.8-3.0％w/v的磷酸盐；抗生素含量＜0.015μg/mL；多价流感抗原的用量为1×10⁶EID₅₀-15×10⁶EID₅₀/0.2ml/人份或0.1×10^6.5-7.5TCID₅₀-10×10^6.5-7.5TCID₅₀/0.2ml/人份，多价流感抗原包括A、B型重组流感病毒组合形成的四价或多价病毒抗原；流感多价疫苗抗原包含了由H1N1、H3N2、B、H5N1组成的流感四价疫苗抗原，由H1N1、H3N2、B、H5N1、H7N7、H9N2组合的六价疫苗抗原或在此基础上包含H1-H16亚型，N1-N9亚型的所有组合得到的流感多价疫苗抗原。

2.如权利要求1所述的喷鼻免疫流感疫苗，其特征在于所述稳定剂为0.07％w/v的谷氨酸盐，3.0％w/v的明胶，3％w/v的精氨酸，7％w/v的蔗糖，2.0％w/v的磷酸盐。

3.如权利要求1所述的喷鼻免疫流感疫苗，其特征在于所述稳定剂为0.05％w/v的谷氨酸盐，1.5％w/v的明胶，2％w/v的精氨酸，9％w/v的蔗糖，0.9％w/v的磷酸盐。

4.如权利要求1所述的喷鼻免疫流感疫苗，其特征在于所述稳定剂为0.09％w/v的谷氨酸盐，3.0％w/v的明胶，3.8％w/v的精氨酸，6％w/v的蔗糖，2.5％w/v的磷酸盐。

5.如权利要求1-4任一所述的喷鼻免疫流感疫苗，其特征在于所述流感四价及多价疫苗抗原为通过反向遗传学技术制备的重组流感减毒活疫苗，A型重组病毒以冷适应、减毒的A/Ann Arbor/6/60为病毒骨架，而B型重组病毒以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架。

6.如权利要求1-4任一所述的喷鼻免疫流感疫苗，其特征在于所述疫苗是经鼻腔途径的液体、喷雾式的气溶胶形式、粉末状、乳脂状及乳化的病毒颗粒。

7.如权利要求1-4任一所述的喷鼻免疫流感疫苗的制备方法，其特征在于该方法为包括以下步骤：

1)利用现有反向遗传学方法，分别将H1N1、H3N2、H5N1和B型流感病毒基因片段构建的8、3或4个重组质粒共转染哺乳动物细胞产生4种多价疫苗抗原；

2)鸡胚大量培养病毒，收集病毒通过除菌、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心或柱层析分离纯化，透析及过滤除菌；

3)浓缩纯化后的多种流感病毒抗原等量混合，同时加入稳定剂如蔗糖磷酸谷氨酸盐缓冲液、抗生素如硫酸庆大霉素制备成喷鼻疫苗。

8.如权利要求1-4任一所述的喷鼻免疫流感疫苗的制备方法，其特征在于该方法为包括以下步骤：

1)利用现有反向遗传学方法，分别将H1N1、H3N2、H5N1和B型流感病毒基因片段构建的8、3或4个重组质粒共转染哺乳动物细胞产生4种多价疫苗抗原；

2)使用无血清培养基培养哺乳动物细胞大量培养病毒，收集病毒通过除菌、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心或柱层析分离纯化疫苗抗原，透析及过滤除菌；

3)浓缩纯化后的多种流感病毒抗原等量混合，同时加入稳定剂、抗生素制备喷鼻疫苗。