[发明专利]木聚糖酶活力的测定方法

权利要求书

1.一种木聚糖酶活力的测定方法，其特征是：

A，制作用MBTH法测得的木糖吸光度值与木糖浓度的标准对应关系曲线；

B，用MBTH法检测待测木聚糖酶水解木聚糖后产生的相当于木糖的吸光度值；根据上一步骤制作的木糖浓度与测得的木糖吸光度值之间的标准对应关系曲线确定待测木聚糖酶的酶解产物中在单位时间内所产生的相当于木糖的还原糖的含量，以此来推算木聚糖酶的活力；

上述步骤A的具体步骤是：分别取6-15组具有不同浓度的木糖标准溶液2mL，浓度范围在0-32微克/毫升之间，加入2mL 0.5当量的NaOH溶液，混匀，取1.2mL加入到试管中做三个平行样，再加入MBTH试剂0.6mL于75-85℃水浴加热15-25min后趁热加入硫酸铁铵试剂1.2mL，室温冷却后于波长620-680nm处测定吸光度值；根据每组木糖浓度与测得的吸光度值之间的关系绘制标准对应关系曲线；

上述步骤B的具体步骤是：将9.9mL木聚糖溶液其浓度为2-4mg/mL，加入到锥形瓶中于30-40℃的水浴摇床中预热8-12min，加入预热至相应温度的木聚糖酶溶液0.1mL进行水解反应，水解时间为60min以内，取水解液2mL，迅速加入到2mL 0.5当量的NaOH溶液中，混匀，取1.2mL加入到试管中做三个平行样，再加入MBTH试剂0.6mL于75-85℃水浴加热20-30min后趁热加入硫酸铁铵试剂1.2mL，室温冷却后于波长620-680nm处测定吸光度值，根据步骤A制作的木糖浓度与测得的木糖吸光度值之间的标准对应关系曲线确定酶解产物中所含有的相当于木糖的还原糖浓度，以此来推算木聚糖酶的活力；木聚糖酶的活力单位可被定义为在上述条件下每分钟产生1nM相当于木糖的量为一个酶活力单位；其中MBTH试剂的制法是3mg/mL的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液和1mg/mL的二硫苏糖醇溶液 等量混合即得，现用现配，一天内有效。

2.根据权利要求1所述的木聚糖酶活力的测定方法，其特征是：上述硫酸铁铵试剂的制法是将(FeNH4(SO4)2)·12H2O，氨基磺酸，盐酸分别加入到水中，使其溶解，并使各成分浓度分别为0.5％，0.5％，0.5当量/升。

3.根据权利要求1所述的木聚糖酶活力的测定方法，其特征是：上述木聚糖来源为桦木(birchwood)木聚糖或榉木(beechwood)木聚糖。

4.根据权利要求1所述的木聚糖酶活力的测定方法，其特征是：上述木聚糖溶液以50mM的丁二酸或醋酸溶液为溶剂。

5.根据权利要求1所述的木聚糖酶活力的测定方法，其特征是：上述测定吸光度值的最佳波长为650nm。