[发明专利]一种沙丁胺醇的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种沙丁胺醇的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

沙丁胺醇属于β—兴奋剂，β—兴奋剂是一类化学合成的苯乙醇胺类衍生物。β—兴奋剂作用机理和肾上腺素、去甲肾上腺素相同，可影响营养物质在动物体内的流向和重新分配，有效促进肌肉组织生长，降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量，因而曾在欧美广泛使用。运动员使用此药，可以增加肌肉和肺活量，缩短高强度训练后的恢复期。但另一方面，β—兴奋剂具有类似肾上腺素的化学结构，而且这类化合物作为促生长剂的用量一般较高，一般为治疗用量的5-10倍。事实表明此类药物不易破坏，如果在屠宰前没有经过一定时间的休药期，则在肌肉和内脏器官会残留较高浓度的药物。如果人食用了含有这些残留药物的可食性组织，这些药物就能与细胞表面的β—受体结合而产生明显的生理作用，如心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、战栗、神经过敏、血管扩张、心率加快等，尤其是对高血压、心脏病、糖尿病、甲亢患者危害更大，严重的可导致死亡。因此为了保证消费者的安全，目前欧美各国均禁止其在畜牧生产上的应用。但还是有某些国家和地区的饲养者在食用性动物喂养中添加沙丁胺醇，导致相关动物性食品中有沙丁胺醇残留，因此定期对沙丁胺醇残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。

目前，检测沙丁胺醇的方法主要有：微生物法、薄层色谱法(TLC)、放射免疫法，高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。微生物法的缺陷是：费时而且缺乏特异性。薄层色谱法的缺陷是：操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训；影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。薄层色谱法、放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测沙丁胺醇的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙丁胺醇的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

本发明所述沙丁胺醇的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的沙丁胺醇的多克隆抗体、辣根过氧化酶标记的羊抗兔的抗体、沙丁胺醇系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、发光液；其特征在于：

所述酶标板的各孔包被有以克伦特罗与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；其中所述包被抗原浓度优选2.5μg/mL。

所述酶标板优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板。

所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa～6.8KDa。

所述沙丁胺醇系列标准溶液分别是0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL。

所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作浓度优选为1∶1000。

所述沙丁胺醇抗体是由沙丁胺醇与分子量范围是6.7KDa～6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的多克隆抗体，其工作浓度优选为1∶1000。

所述发光液是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(体积比)H₂O₂的混合液。所述鲁米诺为发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。

所述洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液。

所述包被溶液是每升水中含1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠的溶液，pH为9.5。

所述封闭溶液是每升洗涤溶液中含10g卵清蛋白(OVA，ovalbumin，也称鸡卵清白蛋白或鸡卵白蛋白，由386aa组成，分子量约43Kd)且加入重量分数0.5％ NaN₃的溶液。

本发明试剂盒最大检测范围为0.1ng/mL～5ng/mL。

本发明试剂盒中涉及的沙丁胺醇标准溶液、酶标羊抗兔抗体溶液、沙丁胺醇抗体溶液、发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、沙丁胺醇标准溶液：以常规方法配制浓度分别为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL的沙丁胺醇标准溶液。