[发明专利]一种甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法

权利要求书

1. 一种甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法，包括小孢子的分离、小孢子胚状体的诱导和小孢子植株的培育，其特征在于：所述小孢子胚状体的诱导为：将制备好的甘蓝型油菜游离小孢子加入含45～55mg/l秋水仙素的全过滤灭菌的NLN-13无激素液体培养基，在30～35℃高温暗培养2天，选择小孢子膨大率大于50％的材料进行后继的诱导培养。

2. 按照权利要求1所述甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法，其特征在于：所述小孢子胚状体的诱导为：将制备好的甘蓝型油菜游离小孢子加入含50mg/l秋水仙素的全过滤灭菌的NLN-13无激素液体培养基，在32℃高温暗培养2天，选择小孢子膨大率大于50％的材料，用不含秋水仙素的全过滤灭菌的NLN-13无激素液体培养基清洗、离心去除秋水仙素，然后加入不含秋水仙素的全过滤灭菌的NLN-13无激素液体培养基调节小孢子密度为1～2个花蕾/ml，在25℃恒温静置暗培养至胚状体产生。

3. 按照权利要求1或2所述甘蓝型油菜小孢子植株的培育方法，其特征在于：所述小孢子的制备为：在大田中选取开花3～7天的甘蓝型油菜花序，选择3.0～4.0mm的花蕾，将其放入滤布中，在无菌条件下用70％酒精消毒1min，然后用0.1％升汞消毒10min，无菌水冲洗3～5次，经清洗和灭菌后的花蕾放入pH为5.8～6.0、含13％蔗糖的B5无激素液体培养基中，轻压挤出小孢子，经300目尼龙网膜过滤到离心管里，于800rpm离心8min，去掉上清液；再加入相同的B5无激素液体培养基在同样转速下离心5min，去掉上清液，即得游离小孢子。

4. 按照权利要求3所述甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法，其特征在于：所述甘蓝型油菜花蕾为3.5mm。

5. 按照权利要求3所述甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法，其特征在于：所述选取的大田中开花3～7天的甘蓝型油菜花序，其保存方法为：4℃冰箱中插水保存1～5天。

6. 按照权利要求1或2所述甘蓝型油菜游离小孢子植株的培育方法，其特征在于：所述小孢子植株的培育为：将产生的小孢子胚状体在80rpm的摇床上、25℃条件下暗培养1～2周，然后将正常发育的小孢子胚转入pH为5.8～6.0、含0.8％琼脂和5％蔗糖的B5固体培养基，置入22℃、16h光周期培养箱内培养，2～3周转换一次培养基直到生长成为正常不定芽苗，然后再转生根培养基获得小孢子再生植株，盆栽驯化后移栽大田。