[发明专利]碱性成纤维细胞生长因子脂质体疫苗及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)脂质体疫苗及其制备方法和用途。

背景技术

血管发生是正常组织生长与发育所必需的过程，而在成年人中，除了女性的生殖系统及机体的修复过程(如伤口愈合)有血管发生外，其它组织则少见，且其过程一般较短暂并受机体严格调控。与之相反，在某些病理性疾病中，如肿瘤、类风湿性关节炎、增生性视网膜病(黄斑变性)、牛皮癣等，常有不受控制的血管发生，根据其中存在不受控制的血管生成的各种病理学疾病状态分类为血管生成依赖性的或血管生成相关性的疾病。

在正常的生理过程中，血管发生中血管内皮细胞的生长受血管生长因子和抑制因子的严格调控；而在与血管生成相关的疾病过程中，它可过度表达一种或几种血管生成因子，如成纤维细胞生长因子(aFGF和bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板来源的内皮细胞生长因子(PD-ECGF)等，相互协同作用刺激血管生成。

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为一种细胞丝裂原和促进血管生长因子，在许多肿瘤的生长中及与异常新生血管相关的疾病，包括牛皮癣、黄斑变性等起重要的作用。肿瘤的生长和血管生成是相辅相成的，肿瘤细胞产生的促血管生成因子能够刺激内皮细胞的生长及生存，而血管的生成不仅是提供营养、氧气和运走代谢物，血管内皮细胞还可向肿瘤提供生长启动的因子。因此，阻止bFGF产生以及抑制其生物学活性的发挥作为一种有效的抗肿瘤方法得到研究，而使用bFGF疫苗，在体内产生bFGF抗体，达到抑制肿瘤生长目的是一种被认为有应用潜力的方法。

免疫佐剂(immunoadjuvant)又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性，但同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性(见抗原)或改变免疫反应类型。种类很多，目前尚无统一的分类方法，常用的佐剂可分为4类：无机佐剂，如氢氧化铝，明矾等；有机佐剂，微生物及其产物如分枝杆菌(结核杆菌、卡介苗)、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物(胞壁酰二肽)等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸(双链多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、异丙肌苷等；油剂，如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。弗氏佐剂目前在实验动物中最常用，又可分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种。免疫佐剂的生物作用包括：(1)抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；(2)佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；(3)佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；(4)佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；(5)可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；(6)可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；(7)改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。

近年来，脂质体在免疫佐剂领域中开始得到应用。作为免疫佐剂，脂质体有着安全性好；毒副作用小；提高抗原稳定性，延长疫苗使用期；能降低被包裹抗原的毒性，增强受体耐受高剂量病原微生物或其毒素攻击的能力等优点。但是不同的疫苗是否都能使用脂质体作为免疫佐剂目前没有定论，并且不同疫苗所需要的脂质体免疫佐剂的配方还需要反复地寻找和筛选。

尽管随着DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现，免疫佐剂研究越来越受到人们的关注，佐剂活性物质的研究报道也很多。但由于佐剂加强免疫反应是一个非常复杂的过程，关于各种佐剂的作用机制至今仍尚未完全了解，每种抗原的合适的佐剂配方需要重新筛选，如何开发适合完整bFGF的免疫佐剂系统目前进展较小，也没有见到关于脂质体作为完整的bFGF免疫佐剂的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种性能良好的，可作为bFGF的免疫佐剂的阳离子脂质体。

解决本发明技术问题的技术方案是：一种阳离子脂质体，由下述配比的成分制备而成：含有DOPE和DOTAP，其摩尔比例为DOPE∶DOTAP＝2∶1～2，还含有重量百分比为0.1～1％的MPLA。

进一步的，上述的阳离子脂质体中DOPE和DOTAP的摩尔比例为DOPE∶DOTAP＝2∶1，其中MPLA的重量百分含量为0.5～1％。

上述的阳离子脂质体可用于制备免疫佐剂。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种bFGF脂质体复合物。该bFGF脂质体复合物是由上述的阳离子脂质体包裹bFGF制备而成。

其中，上述bFGF脂质体复合物中的bFGF和脂质体的重量比，即药脂比为3～10％。