[发明专利]重组人bFGF和人PDGF－B的双基因腺病毒载体及其用途

说明书

技术领域

本发明属于基因治疗领域，具体涉及一种重组了人bFGF和人PDGF-B的腺病毒双价载体及其用途

背景技术

心血管系统疾病是现代社会严重威胁人类健康，引起死亡的主要疾病。冠心病是最常见的心血管疾病，有极高的死亡率和致残率。治疗冠心病最常用的方法是介入治疗冠状动脉搭桥手术及心肌内激光打孔方法，尽管这些方法对冠心病的治疗起到了积极作用，但均有其自身局限性。当前国外学者正尝试用血管新生疗法消除或减轻心肌缺血状态，血管新生是应用促血管生长因子刺激心肌缺血区小血管生长和侧枝循环形成即心肌缺血区的自我搭桥。由于该方法既可单独应用，又可与冠脉搭桥、心肌内激光打孔等方法联合使用，所以在冠心病治疗研究领域中受到了广泛重视。

促血管生长因子治疗冠心病是近十年来研究的热点之一，并已取得了较大进展，有些促血管生长因子，如VEGF、FGF-2、FGF-4等已用于II、III期临床。目前研究表明能够促进冠脉血管生长的因子诸多，优缺点各异，应用较多的是VEGF、FGF、Ang-1、TGF-β、HGF、HIF1等因子。随着临床各种治疗方法的进展和新型载体的出现，应用促血管生长因子治疗冠心病将显示更广阔的前景。

目前，临床应用促血管生长因子主要通过以下几种方式：重组蛋白、腺病毒载体和质粒载体。蛋白治疗和基因治疗各有其优缺点。蛋白治疗的优势在于药代动力学过程明确，给药剂量可控，不用病毒等免疫原性物质。但存在靶器官以外部位的血管新生，使潜在性癌变的危险增加；蛋白因子半衰期短，需反复给药，使用大量蛋白制剂，其价格昂贵，且有可能造成过敏等缺点。而基因治疗的优势在于治疗基因可进行持续表达，具有细胞特异性，有可能一次见效，还可能一次将多重因子导入，发挥协同作用。

当前本领域大多数的临床前研究和所有的临床研究都采用单一细胞因子治疗。但心血管的生成是一个复杂的过程，需要多种生长因子的协同作用才能形成有功能的成熟稳定的新血管网，因此这十几年来几乎所有大规模的随机、双盲、安慰剂对照的人体实验都不成功。事实上，临床上单一采用VEGF或bFGF治疗心肌缺血还存在一些争议，并且在动物和人体试验中采用单一因子进行治疗产生了一些严重的并发症，例如动物实验中，VEGF能导致病理性血管生成、动脉粥样硬化、视网膜出血，甚至产生血管瘤；过度表达的PDGF能导致心肌纤维化，进而导致心衰甚至死亡，因此需要改善现在的研究方案和治疗手段。国内外前期的临床前研究发现，bFGF在体内选择性促进血管生成而不刺激其他组织生长，而PDGF-BB(PDGF-B基因表达的蛋白形成的同源二聚体结构，称为PDGF-BB)则能通过募集周细胞和血管平滑肌细胞到新生血管，从而促进新生血管的成熟和稳定。

1993年，第一例应用腺病毒载体进行基因治疗的临床方案得到美国NIH的DNA咨询委员会(RAC)批准。自此，腺病毒载体成为继逆转录病毒载体之后被广泛应用的病毒基因转移系统。虽然腺病毒载体还未完全解决一过性表达的缺陷，但由于其转基因效率高等优点，在临床上已得到越来越多的应用。截至2008年3月为止，在全世界范围内开展的1347项基因治疗临床方案中，以腺病毒为载体的方案占了其中的25％(342项)，逐年呈现上升趋势，适应症包括肿瘤、心血管疾病、传染性疾病(包括艾滋病)等各个方面。心血管疾病的基因治疗方案达到121项(占9％)，绝大部分以裸DNA(62项)和腺病毒(46项)为载体系统。进展较快的方案包括：VEGF165裸DNA心肌内注射治疗严重心绞痛，已于2007年7月在加拿大完成了II/III期临床试验；Ad-FGF-4心肌内注射治疗严重心绞痛的方案也于2006年12月在美国进入III期临床试验。