[发明专利]一种检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫试剂盒无效

专利信息
申请号: 200810304768.2 申请日: 2008-10-08
公开(公告)号: CN101382547A 公开(公告)日: 2009-03-11
发明(设计)人: 肖付刚;肖军 申请(专利权)人: 肖军
主分类号: G01N33/543 分类号: G01N33/543;G01N21/78;G01N33/577
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 100045北京市*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 三聚 间接 竞争 免疫 试剂盒
【权利要求书】:

【权利要求1】一种检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫试剂盒,其中包括:96或48孔包被板(1),三聚氰胺标准品(2),抗三聚氰胺的抗体冻干品(3),酶标记的羊抗兔抗体冻干品(4),洗涤液(5),显色液A(6),显色液B(7)和终止液(8)。

【权利要求2】根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述酶标记的羊抗兔抗体冻干品为HRP-羊抗兔抗体冻干品,洗涤液为含有吐温的Tris-HCl缓冲溶液,显色液A为含有过氧化氢的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液,显色液B为四甲基联苯二胺的乙醇水溶液,终止液为硫酸溶液。

【权利要求3】根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述的包被板(1)包被固相抗原三聚氰胺-BSA;用50mmol/L pH9.6的Na2CO3-NaHCO3缓冲液将三聚氰胺-BSA稀释至10mg/L做为包被液,96或48孔微孔板每孔加0.1mL包被液,4℃放置过夜,弃去包被液,冲洗三次,每孔加0.15mL含3g/L BSA的50mmol/L pH9.6的Na2CO3-NaHCO3缓冲液封闭,4℃放置过夜,弃去封闭液,真空抽干,板条密封后置-20℃冷冻保存。

【权利要求4】根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述的三聚氰胺标准品(2)共6瓶,浓度分别为:0ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,40ng/mL,80ng/mL,200ng/mL。

【权利要求5】根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述的抗三聚氰胺的抗体冻干品(3),为抗三聚氰胺的单克隆抗体的冻干品。

【权利要求6】根据权利要求5所述的抗三聚氰胺的单克隆抗体,其制备方法如下:将三聚氰胺和BSA或KLH或OVA偶联作为抗原,免疫雌性BalB/c小鼠,检测多抗效价达到1:2000后,在PEG-4000作用下将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,经过HAT选择培养,用间接ELISA法检测培养上清,对检出的阳性克隆孔采用有限稀释法进行亚克隆,雌性小鼠BalB/c腹腔注射液体石蜡、杂交瘤细胞,经培养后抽取腹水,腹水中即含有抗三聚氰胺的特异性单克隆抗体。

【权利要求7】一种用权利要求1所述的试剂盒检测三聚氰胺的方法,其特征在于:取包被有三聚氰胺-BSA的微孔包被板,加入三聚氰胺标准品或处理好的样品到各自的微孔中,再加入三聚氰胺抗体,暗处静置反应,洗涤液洗涤,加酶标记的羊抗兔抗体,进行标记免疫反应,洗涤液洗涤,加显色液A和显色液B,暗处静置后加终止液,在450nm处测量吸光度值,对照标准曲线计算样品中的三聚氰胺含量。

【权利要求8】根据权利要求7所述的检测三聚氰胺的方法,其操作为:样品前处理;取包被有三聚氰胺-BSA的微孔包被板,加入0.05mL的三聚氰胺标准品或处理好的样品到各自的微孔中,加0.05mL抗三聚氰胺抗体,37℃暗处静置30min,洗涤液洗三次,加0.1mL酶标记的羊抗兔抗体,37℃暗处静置30min,用洗涤液洗三次,加0.05mL显色液A和0.05L显色液B,暗处静置15min后加终止液,在450nm处测吸光度值,从标准曲线计算样品中的三聚氰胺含量。

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