[发明专利]人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术与医学领域。具体地说，本发明涉及一种新的人类附睾表达蛋白HEL-214及其编码基因与应用

背景技术

本世纪人类的发展面临着两个严峻的问题：一方面，全球人口在急速膨胀，预计在2050年将达到90亿；另一方面，据世界卫生组织调查，大约15％的夫妇存在着不育问题，发达国家不育症的发病率在最近10年飚升，欧洲发达国家可高达30％，其中男性因素约占一半。世界卫生组织预测，随着环境污染和性传播疾病等致病因素的增加，本世纪，不育症将成为仅次于肿瘤和心脑血管病的第三大疾病。但男性不育并未引起社会和医学界的足够重视，因此有关男性生殖健康的研究进展缓慢，明显落后于其它学科。缺少分子生物学层面诊断与治疗不育症的有效方法。由于精子发育障碍不能自然受精，需要医生通过做试管婴儿获取后代。利用此种技术获取后代，不仅耗费了宝贵的时间与资金，而且存在很多影响健康的潜在因素，失去了正常生育过程中精卵天然结合、优势选择遗传后代的机会。给家庭与社会带来了沉重的精神和经济负担。

全世界人口的急剧增长造成了资源耗竭和环境恶化，成为人类健康与生存的严重威胁。当前世界人口已超过60亿，据专家估计，中国资源环境能支撑的最大人口容量为15-16亿。目前可供人类选择的避孕措施还很有限，离“高效、安全、可逆”的标准还相差较远。发展安全有效、先进实用的避孕节育新技术、新产品，以满足不同人群、不同层次的避孕用药的个性化要求是近年来国内外避孕节育技术发展的总趋势。

附睾是精子成熟的重要器官，睾丸产生的精子需要通过与附睾管腔微环境相互作用才能获得运动、受精、防御和维持正常胚胎发育以及防御等生物学功能。附睾内大约有200余种分泌蛋白与精子相互作用，参与精子成熟过程，但是人们对这些蛋白的功能知之甚少。与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展，为男性不育症的诊断和治疗以及开发新型避孕药物提供侯选分子靶标，同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种新的人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214。

一种人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214，它具有序列表中序列2的氨基酸序列或将序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸残基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白质或多肽。

本发明的人附睾分泌蛋白命名为：HEL-214，由147个氨基酸残基组成。HEL-214蛋白存在有1个N糖基化位点和5个磷酸化位点，包括3个酪蛋白激酶II磷酸化位点和2个蛋白激酶C磷酸化位点。而且，分子中含有1个Phytochrome chromophore attachment site功能域。

本发明的第二个目的是提供编码人类附睾表达蛋白HEL-7的基因。它是下列核苷酸序列之一：

序列表中序列1的DNA序列，GenBank注册号为：FJ237362；

编码序列表中SEQ ID No.2蛋白质序列的多核苷酸；

与序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

序列表中的SEQID No.1，全长c D N A序列为631bp，定位于人14号染色体上，编码147个氨基酸，编码蛋白为HEL-214，含有信号肽，其开放阅读框为444bp，是一个完整的读码框。

本发明的第三方面，提供了采用基因工程技术制备具有人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214活性多肽的方法，它包括含有上述多核苷酸序列的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞。

本发明的第四方面，提供了与上述人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214特异性结合的抗体，以及由此开发的用于附睾功能异常所致的不育症的辅助诊断。

本发明的第五方面，提供了检测样本中是否存在人类附睾表达精子结合蛋白HEL-214的方法，它包括：将待测样品与分泌蛋白的特异性抗体在一定条件下共同作用，观察是否形成抗原抗体复合物，有抗原抗体复合物形成就提示样品中存在分泌蛋白。