[发明专利]一种川附子组织培养及快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于药材栽培技术领域，特别涉及一种川附子组织培养及快速繁殖的方法。

背景技术

附子(Radix Aconiti Lateralis Preparata)是毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛等功效；用于亡阳虚脱、肢冷脉微、阳痿、宫冷、心腹冷痛、虚寒吐泻、阴寒水肿、阳虚外感、寒湿痹痛、阴疽疮疡等。

附子是四川传统道地中药材之一，具有重要的药用和经济价值。四川省江油市作为附子的道地产区，有1400多年的种植历史，2006年江油附子取得地理标志产品保护(2006年第41号公告)，是国家附子生产商品基地，产品行销全国和出口。但近年来在江油附子生产中出现了一些问题，附子种植面积日益萎缩，药农经济效益逐年下降，附子产业前景堪忧。主要原因有以下两点：其一，附子的频繁换种并缺乏统一管理，栽培品种存在不同程度的混乱和混杂现象，严重影响了附子的产品质量及其药用价值。其二，附子生产长期采用无性繁殖，病害累积，其中霜霉病、白绢病、根腐病等病害频繁发生，导致附子产量降低，生产成本增加，严重影响和制约着附子生产的发展。

目前乌头的人工栽培主要靠子根繁殖，耗种量大，而且由于病毒感染等原因造成种性退化，产量和品质降低，每年需在高山留种换种，难以适应规模化和标准化生产的需要，通过组织培养实现种苗脱毒生产是解决上述问题的主要途径之一。

组织培养特别是药用植物的组织培养存在种群差异，甚至同一植株的不同组织、不同器官在组织培养时都可能存在较大差异。胡延玉(植物生理学通讯，1985，16(2)：37-40)利用茎尖和带腋芽茎段培养获得再生植株，但所用培养基成分复杂，生长周期长。林静等(贵州科学，1998，16(2)：120)利用贵州乌头叶片和幼茎进行培养，叶片只诱导出愈伤组织阶段而未分化出芽。关文灵等(中草药，2003，34(6)：561-563)以云南乌头试管苗的叶片为外植体，通过直接诱导不定芽的途径得到再生苗。王跃华等(中国中药杂志，2005，30(15)：1197-1199)以叶柄为外植体得到再生苗。

发明内容

本发明的主要目的是针对上述附子生产中存在的问题，提供一种川附子组织培养及快速繁殖方法，主要解决川附子生产中现行品种的抗病性差、产量低而不稳、品种混杂等问题，为川附子GAP生产奠定基础。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种川附子组织培养及快速繁殖方法，包括下述主要步骤：

第一步：外植体的选择与消毒

三月份选取一年生健壮川附子(乌头)植株的茎尖、叶片、根、茎段、带腋芽的茎段、叶柄、或者上一年收取的种子等(以茎尖、叶片、茎段、带腋芽的茎段为佳)为外植体(作为接种材料)，低温4℃处理3天；用自来水冲洗干净，用70～75％酒精处理15～20s，0.1％升汞液浸泡10～12min，倒去升汞液，用无菌水换洗4～5次；将茎尖剥离后切成0.2mm长，根、茎段、带腋芽的茎段及叶柄切成1.5cm左右(可为1.3～1.7cm)，叶片切成1cm×1cm方块(种子不需切)，待用；

第二步：接种、诱导愈伤组织

以MS为基本培养基，在基本培养基中附加NAA(α-萘乙酸)0.1～0.2 mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)1.0～4.0mg/L作为诱导愈伤组织的培养基，将上述第一步处理好的外植体按常规方法接种进行愈伤组织诱导，黑暗培养28～32天左右，得到愈伤组织；

第三步：诱导丛生芽

在MS基本培养基中附加NAA 0.1～0.2mg/L+6-BA 2.0～2.5mg/L作为分化培养基诱导丛生芽，将上述第二步获得的愈伤组织转接到该分化培养基上，进行丛生芽诱导，光照培养28～32天左右，诱导出丛生芽；

第四步：诱导生根

在MS基本培养基中附加IBA(吲哚丁酸)1.0mg/L+AC(活性碳)3.0g/L⁺PVP(聚乙烯吡咯烷酮)3.0g/L作为生根培养基，将上述第三步长至3～5cm的丛生芽转接到该生根培养基上诱导根的形成，培养时间为20～25天左右，得到生根的试管苗；

第五步：炼苗移栽