[实用新型]针刺式组织片玻璃化冷冻载体

说明书

技术领域

本实用新型属于玻璃化冷冻保存领域，特别涉及卵巢、肝脏等器官或组织的玻璃化冷冻载体。

背景技术

玻璃化冷冻法是近年提出的超快速冷冻方法，比程序化冷冻耗时短，方便廉价，无冰晶损伤。但玻璃化冷冻存在的缺点是：所需冷冻保护剂浓度较高，导致细胞毒性增加，限制了其在人体组织、器官保存中的应用。改善冷冻载体或方法来提高冷冻速率以降低冷冻保护剂的浓度，是近年来学者对玻璃化冷冻研究探索的主要内容。

在对哺乳动物卵巢组织玻璃化冷冻中，传统的玻璃化冷冻方法是采取冷冻管作为载体(麦管或冷冻小管)，将卵巢组织切成片状或条状，采用高浓度的冷冻保护剂脱水后，将组织连同保护剂一起吸入或放入冷冻管，再直接放入液氮中，该方法冷冻保护剂体积较大，降温速率较慢，因此，近年来被直接与液氮接触的冷冻方法所取代。如对人和小鼠卵巢组织的研究中，采用电镜铜网或聚酯纤维薄膜作为载体(见Hasegawa A，HamadaY，Mehandjiev T and Koyama K(2004)In vitro growth and maturation as well as fertilizationof mouse preantral oocytes from vitrified ovaries.Fertil Steril 81，824-830.；Isachenko E，Isachenko V，Rahimi G and Nawroth F(2003)Cryopreservation of human ovarian tissue bydirect plunging into liquid nitrogen.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 108，186-193.)；有研究将卵巢组织块放入冷冻管中，将少量液氮直接覆盖于卵巢组织来增加组织与液氮接触面积，以加快降温速率(见Chen SU，Chien CL，Wu MY，Chen TH，Lai SM，Lin CW andYang YS(2006)Novel direct cover vitrification for cryopreservation of ovarian tissuesincreases follicle viability and pregnancy capability in mice.Hum Reprod 21，2794-2800chen et al，2006)，也有研究采用无载体的玻璃化冷冻(见Yeoman RR，Wolf DP andLee DM(2005)Coculture of monkey ovarian tissue increases survival aftervitrification and slow-rate freezing.Fertil Steril 83，1248-1254；Li YB，ZhouCQ，Yang GF，Wang Q and Dong Y(2007)Modified vitrification method for cryopreservationof human ovarian tissues.Chin Med J(Engl)120，110-114)。这些载体及其配套的方法或者不能使组织充分接触液氮，或者组织表面的冷冻保护剂残留会降低冷冻速率，特别是多样本同时进行冷冻时，会增加操作难度，难以保证各样本以同样的条件脱水和冷冻。

发明内容

本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新型的针刺式组织片玻璃化冷冻载体，使用此种载体，不仅可提高降温速率，降低冷冻保护剂浓度和毒性，在多样本同时进行冷冻时，使各样本能以同样的条件脱水和冷冻，而且操作简单、高效。

本实用新型所述针刺式组织片玻璃化冷冻载体由一端封闭、一端开口的冻存管和针刺装置组成；所述针刺装置包括针头和安装在针头上的用于穿组织片的针，针头上设置有与冻存管开口端的内部形状和尺寸匹配的部段；针刺装置与冻存管组合后，用于穿组织片的针位于冻存管内，针头为冻存管的管塞将冻存管开口端封闭。

为防止载体放于空气中因液氮挥发引起的压力骤变使冻存管爆裂，冻存管内设置有隔板，该隔板与开口端之间的空间用于装液氮和穿在针上的组织，该隔板与封闭端和它们之间的管壁围成的空间装有减压填料，隔板、冻存管的封闭端壁或/和它们之间的管壁上开有减压孔。隔板安装位置的优选方案：隔板与冻存管封闭端的间距L1是隔板与冻存管开口端的间距L2的五分之一至四分之一。减压填料为棉绳或棉纱或其它纤维等软性材料。