[实用新型]丙型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测丙型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸。

背景技术

HCV是1989年由美国Choo等从受感染的黑猩猩血液标本中最初发现，主要由血液、体液传播，占输血后肝炎的70％。据世界卫生组织统计，全球估计约1.7亿人感染HCV。丙型肝炎慢性化率为50％-85％，其中又有20％可发展为肝纤维化，危害十分严重。我国HCV抗体携带者达4千万左右。到目前为止丙型肝炎既无有效疫苗，亦无有效的治疗方法，预防感染是唯一有效的方法。HCV抗体检查和乙肝表面抗原(HBsAg)、人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体及梅毒(TP)抗体检查是我国法定的四个血源性筛查项目，意义十分重要。

目前HCV抗体检测试剂主要检测HCV IgG。IgM检测只有为数不多的研究报道，集中于用酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行检测。对IgG检测不能说明患者是现症感染或既往感染，虽然IgM的检出率为IgG的50％-80％，但IgM检测阳性基本说明患者是现症感染。除此之外，IgM抗体和体内病毒复制即HCV RNA检出率相关；和体内体内肝炎发展程度、肝细胞坏死相关；在对HCV病人治疗过程中，IgM的变化亦提示治疗效果的好坏；另外IgM的出现和HCV的不同亚型感染相关，因而对HCV IgM检测具有积极的参考意义。

运用免疫层析胶体金技术检测HCV IgM尚无报道。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，已得到较为广泛运用，基本原理如下：利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测(T)线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种HCVIgM抗体快速检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。

本实用新型提供一种HCVIgM抗体快速检测试纸。包括上样垫(1)、紧密连接于上样垫一端的含有标记HCV混合抗原的胶体金垫(2)、与胶体金垫的另一端紧密连接的硝酸纤维素(NC)膜(3)和紧密连接于NC膜另一端的吸样垫(4)，NC膜包被有相互分离的检测(T)线(5)和质控(C)线(6)，上样垫、胶体金垫、NC膜和吸样垫粘贴到塑料支撑板(7)上形成试纸条，试纸条亦可以装入塑料卡中形成卡式包装，其特征在于T线为包被在NC膜上的抗人IgM抗体，胶体金垫为标记的HCV混合抗原构成。

所述的HCV IgM抗体快速检测试纸，其特征在于所述的HCV混合抗原为重组表达HCV的核心抗原(Core)和非结构蛋白(NS)3抗原，亦可选择性再加入HCV的NS4、NS5、E1和E2区抗原。

所述的HCV IgM抗体快速检测试纸，其特征在于所述的上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。

所述的HCV IgM抗体快速检测试纸，其特征在于，所述的抗原的包被方法为：以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1ul/cm的参数进行划线，包被T线，同时在NC膜上部包被抗HCV抗体作为C线。划线后将NC膜在干燥间(温度20-25℃，湿度小于30％)干燥8-10小时。

所述的HCV IgM抗体快速检测试纸，其特征在于，所述的混合抗原标记胶体金颗粒的方法为：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K₂CO₃调至pH8.0，按100ml胶体金溶液加入1mg HCV重组混合抗原，室温搅拌2小时，加入1％牛血清白蛋白(BSA)，0.1％聚乙二醇(PEG)20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按1ml溶液铺22cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间(温度20-25℃，湿度小于30％)干燥2-4小时，制成胶体金垫。