[实用新型]应用于快速诊断烈性传染病霍乱的专用微流控芯片

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种应用于快速诊断烈性传染病霍乱的专用微流控芯片，属于测试领域。

背景技术

霍乱是由霍乱弧菌引起的一种烈性传染病，属于国际检疫传染病，也是我国传染病防治法规定的甲类传染病病原之一。该病发病急、传播快、涉及范围广，可引起局部和世界性的爆发流行为特征；是一种严重危害人类健康和生命的传染病。霍乱弧菌是导致感染者严重腹泻的病原菌，作为国际检疫传染病——霍乱的病原诊断，以检出O1群霍乱弧菌或O139群霍乱弧菌为准。

长期以来，对霍乱弧菌的诊断都是采用传统的检验方法，即形态学、生理生化特征及血清学鉴定以及噬菌体分型等，最快的也要十几个小时才能完成。时间长、样本量大、准确率低，且一次只能获得一种致病菌种类和数量。近年来，在传统的检测方法基础上，单克隆抗体和分子生物学技术越来越多地应用到霍乱弧菌的研究中，相关测试方法的飞速发展为霍乱弧菌的检测提供了新的强有力的手段。其中主要有：胶体金标记免疫层析技术、实时荧光PCR技术、基因传感器技术、间接免疫荧光技术、酶联免疫吸附技术和核酸序列分析技术等。然而，上述方法中，病原体的分离费时费力，不适用快速批量诊断。由于需要孵育、洗脱、显色等多重步骤，一般需要数小时。核酸PCR检测诸法中，实时荧光定量PCR敏感性高、特异性强，可以缩短检测窗口期，但需要较昂贵的仪器设备，无法大面积推广，且分离核酸和进行PCR反应也需要数小时，故无法快速检测。免疫胶体金试纸条可以在数分钟内获得结果，实现快速检测，但一般只能达到半定量测定标准，敏感性差，成本高，也难以同时检测多种抗原。近年来发展很快的时间分辨荧光免疫分析方法和化学发光方法虽然灵敏度高，但是仍需要繁琐的前处理，且检测价格昂贵。其中免疫分析技术是实现传染病准确诊断的重要手段，通过测定病后2周血清抗菌“诊断蛋白”(抗原/抗体，简称DP)含量，可以获取病原体的种类和数量。免疫分析本身有很强的选择性，对传染病的早期诊断，判断疗效及预后等方面均有重要的意义。然而重大传染病菌的检测非常复杂，传统的免疫分析通常只针对单一指标进行检测。由于一种诊断蛋白可出现在不同病菌，或不同诊断蛋白可在同一致病菌同时出现，因此，开展高效的多重免疫分析方法(SMIAs)，从生物相关性的角度真实地定量反映各种致病菌的种类和数量；在早期预防和联检多种传染病、判断传染病菌发展程度、观察和评价治疗效果等方面都具有重要的医学价值。

O1、O139霍乱弧菌联检需要同时获取TP0821、TP0319、TP0624以及霍乱弧菌O139菌体蛋白、甘露糖敏感血凝(rMSHA)等几种诊断蛋白含量，综合分析才能得到，其中，前四种蛋白含量的检测更具诊断意义。

所述诊断蛋白TP0821、TP0319、TP0624、霍乱弧菌O139菌体蛋白，以及，相应的TP0821抗体、TP0319抗体、TP0624抗体、O139菌体蛋白抗体，其技术含义在霍乱诊疗技术领域是公知的。

微流控芯片技术是将采样、预处理、加试剂、反应、分离、检测等集成在一块几平方厘米的微芯片上进行的一门前沿技术，具有分析速度快、信息量大、试剂消耗少、污染小、操作费用低、仪器简便以及检测速度和灵敏度俱佳等优点。微流控技术代表着21世纪分析仪器的发展方向。目前基于微流控芯片的检测技术主要有紫外吸收检测、激光诱导荧光检测、电导检测、伏安检测等。其中紫外吸收检测和电导检测比较通用，但是其灵敏度较低；激光诱导荧光检测和伏安检测灵敏度较高，但是测定对象不多，限制了它们的推广。而传感器中采用电化学检测，体积小、自动化程度高、成本低，非常适合于现场分析。

目前，在微流控芯片技术领域，利用霍乱多种特征抗体同时检测、快速诊断霍乱的技术尚未见报道。

实用新型内容

本实用新型所要解决的技术问题是，在微流控芯片技术这样一个总的技术框架内，研发出一种能够利用霍乱多种特征抗体进行同时检测的应用于快速诊断烈性传染病霍乱的专用微流控芯片。