[实用新型]人血清铁蛋白纳米免疫磁珠快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种以纳米免疫磁珠技术检测人血清铁蛋白的免疫层析快速诊断试剂-人血清铁蛋白纳米免疫磁珠快速检测试剂盒。

背景技术

血清铁蛋白(Serum ferritin，SF)，是一种贮藏铁的蛋白质，正常情况下微量存在于血液中，其含量是判定体内缺铁及铁负荷过多的有效指标。铁蛋白在内质网合成，具有L、H两种亚基，由24个亚基组成一个中空的蛋白外壳，中间为容纳铁离子的腔，每个铁蛋白最多可携带4000个铁离子。研究表明，血清铁蛋白含量变化直接反应机体的贮铁状态，正常的情况下，血清中每1ng/ml的铁蛋白，约相当于身体8～10mg之铁蛋白贮存量。血清铁蛋的含量男女存在差异，正常值参考值一般定义为男性：15～200ng/ml，女性：12～150ng/ml，儿童：7～140ng/ml。由于检测方法的不同和地区差异，参考值略有变化。

铁蛋白含量减少是机体缺铁性贫血的最重要的指标，但一般低于30ng/ml则有缺铁性贫血的倾向，需要相应的铁补充。缺铁性贫血是妇女和儿童常见的疾病。血清铁蛋白增高也是机体异常的表现，血清铁蛋在肝细胞中大量合成，而循环中的铁蛋被白肝细胞吸收清除，所以肝细胞异常会造成血清铁蛋白增高，肝炎，特别是原发性肝癌常表现为血清铁蛋白异常增高。此外肺癌、胰癌、白血病等时，癌细胞合成的铁蛋白增加，使血清铁蛋白升高。当铁蛋白含量大于300ng/ml时应考虑是否患有以上疾病。

20世纪70年代起在临床诊断上就开始进行血清铁蛋白的检测，目前主要的诊断方法为酶联免疫法ELISA或化学发光法等技术进行检测。

纳米免疫磁珠快速检测试剂是一新型的检测方法。纳米免疫磁珠是含有铁元素的超顺磁纳米颗粒，外面包覆着聚乙烯类高分子物质，并可带有羧基或氨基，用于和蛋白质分子偶联。纳米免疫磁珠和蛋白偶联后，可以制备成免疫层析类诊断试剂，并运用专用的微量磁性物质的检测仪MICT进行检验，具有具有检测快速、操作简便、适合现场检测和实时记录保存结果等优点。运用纳米免疫磁珠进行血清铁蛋白的检测试剂尚未有报道。

发明内容

本实用新型是提供一种检测快速、操作简便、适合现场检测和实时记录保存结果的人血清铁蛋白纳米免疫磁珠快速检测试剂盒，技术方案如下：

一种人血清铁蛋白免疫磁珠快速检测试剂盒10，其特征是试纸条9由在塑料支撑板7一端搭接上样垫1，上样垫1的一端搭接含有标记抗人血清铁蛋白抗体有纳米免疫磁珠垫2，在磁珠垫2的一端搭接硝酸纤维素NC膜3，NC膜3包被有相互分离的检测线T5和质控线C6，T线为配对的铁蛋白抗体，C线为抗鼠IgG，NC膜3另一端搭接吸样垫4组成，将试纸条9装入两个上角为圆弧形状的长条形状的盒盖11、盒底20构成的试剂盒10中。

试剂盒标记和包被用抗体为抗人血清铁蛋白抗体，为配对的单克隆抗体或单抗-多抗配对。

纳米免疫磁珠为含铁的超顺磁乳胶颗粒，直径为100-250nm，表面富含羧基或氨基；优选为200nm，表面含羧基的颗粒。塑料支撑板厚度小于0.3mm；NC膜的宽度为35mm；上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。

抗体的包被方法为：以0.01M磷酸盐缓冲液PBS将抗血清铁蛋白抗体配制成0.1-1.0mg/ml的包被液，优选浓度为0.1-0.3mg/ml，用喷膜仪在NC膜下部以1ul/cm的参数划线，包被T线，；同时在NC膜上部包被抗鼠IgG抗体作为C线。两包被线之间的距离为5-10mm，划线后将NC膜在干燥间温度20-25℃，湿度小于30％干燥8-10小时。

抗体的标记方法为：取10mg磁珠，用50mM 2-N-吗啉乙磺酸MES，pH5.7配制成1％的磁珠溶液，加入2mg水溶性碳二亚胺EDC，37℃10min，再加入100-500ug抗铁蛋白抗体，优选为150-250ug的铁蛋白抗体。37℃孵育2小时，期间不断摇晃，然后用磁力架吸附磁珠，将缓冲液更换至含0.5％牛血清白蛋白BSA，0.5％吐温Tween 20的0.01M PBS，完成标记。再用工作液20mM硼酸盐缓冲液，pH8.5，含1％BSA，0.5％Tween，5％蔗糖将磁珠配制成0.5mg/ml的溶液，按1ml溶液铺22cm2的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间干燥2-4小时，制成纳米免疫磁珠垫。