[实用新型]鼻咽癌遗传检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属生物技术领域，具体涉及一种鼻咽癌遗传风险基因位点检测试剂盒，是通过利用荧光定量PCR，检测被检者基因组DNA样本中的两个鼻咽癌遗传风险基因SNP位点基因型的试剂盒。

背景技术

鼻咽癌是人体鼻咽腔粘膜上皮和腺体上皮组织，在各种化学性、物理性和生物性致癌因素的作用下，或机体自身存在遗传易感性的情况下，鼻咽腔组织发生过度增生及异常变化，所形成生长能力很强、能无限制的繁殖和分裂的恶性肿瘤，该肿瘤可分泌溶解组织的物质侵犯和溶解正常组织、甚至能压迫邻近器官组织。鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，恶性变比率高，自然生存时间平均为18.7个月，起病隐蔽，早期常无明显症状，一般情况下常见鼻塞、涕血或回缩性血涕、耳鸣及头痛等，晚期常有颈淋巴结肿大及脏器转移。

国内外大量关联研究及流行病学研究表明，鼻咽癌与遗传因素关系非常密切，在南方鼻咽癌高发地区可见该疾病有家族聚集趋势，目前该疾病的遗传易感性研究主要集中于种群特异性基因和常见的解毒酶基因。通过基因检测可以确定遗传高风险人群，并可相应制定有针对性的预防和治疗策略，对降低鼻咽癌的发病和死亡都具有重要作用。

国内外大量的关联研究表明，鼻咽癌的发病与细胞色素P450 2E1基因(CYP2E1)上的Rsa I位点和X射线交错互补修复基因1(XRCC1)上的Arg399Gln位点这两个SNP位点基因型有很密切的关系。

细胞色素P450 2E1基因(CYP2E1)是细胞色素P450超基因家族成员，定位于细胞内质网和微粒体，在全身各组织器官都有表达，其中肝表达量最多，在鼻咽组织也有表达。由于CYP2E1是亚硝胺类代谢的主要酶类，该基因的变异会直接影响亚硝胺的生物活化，而亚硝胺的活性代谢物具有氧化损伤DNA进而导致癌症的作用，因此CYP2E1基因多态性与各种癌症的发生有关，其中包括肝癌、鼻咽癌、肺癌、食管癌等。CYP2E1基因Rsa I酶切位点是5’UTR端上的一个C/T多态位点，c1、c2是该位点的两个等位基因，后者可增加该基因的转录效率，提高酶活性。该多态位点的基因型有c1c1、c1c2、c2c2，研究显示，当个体携带c2c2基因型时，CYP2E1的诱导活性显著增强，即诱导产生的CYP2E1水平上升，因此亚硝胺转化生成的致癌物质的量也大大增加，使得鼻咽上皮细胞易发生癌变，增加了鼻咽癌的发病风险。

射线交错互补修复基因1(XRCC1)第一个分离到的影响细胞对电离辐射敏感性的哺乳动物基因，广泛参与DNA损伤的修复。XRCC1在机体内各个组织中的表达量均不高，在大肠中的表达相对较高。目前，在XRCC1基因中共发现3个单核苷酸多态(SNP)，三者都位于外显子中，氨基酸序列的改变会导致蛋白质高级结构的改变，从而影响XRCC1蛋白与其他酶的结合能力，最终影响机体修复损伤DNA的能力。若DNA损伤修复能力发生下调，则易发生体细胞癌变，各种癌症的发病风险因此上升。XRCC1基因Arg399Gln位点是该基因第10号外显子上的一个G/A多态位点，引起XRCC1基因编码蛋白的第399个氨基酸由Arg变为Gln，该氨基酸处于BRCT I区域。A、G是该位点的两个等位基因，前者会增强XRCC1蛋白与DNA-致癌物加合物的结合能力。该位点有三种基因型，分别为AA(Gln/Gln)、AG(Gln/Arg)、GG(Arg/Arg)，国外关联研究显示，当个体携带AA基因型时，XRCC1基因BRCT I功能域的空间构象发生改变，导致XRCC1蛋白不能正常结合于DNA受损处，而影响PARP1的活性，最终使得碱基切除修复能力被削弱，DNA损伤增多，体细胞癌变增多，各种肿瘤的患病风险升高。鼻咽组织是与环境致癌物接触较多的部位，容易发生DNA损伤和体细胞突变，若碱基切除修复能力下调，则鼻咽癌的患病风险会升高。

荧光定量PCR是近几年来兴起的生物学技术，具有准确性高、重现性好等特点，已广泛用于基因表达研究、SNP位点分析等诸多领域，该方法采用完全闭管检测，省去了对PCR产物后处理，避免了交叉污染，结果判断有计算机完成，简化了操作步骤，并增加了结果的可靠性。是一种简便快速检测SNP位点基因型的方法。

发明内容

本实用新型针的目的是提供一种采用荧光定量PCR技术同时检测两个鼻咽癌遗传风险基因SNP位点的试剂盒。该试剂盒由包装盒体、衬垫、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管、装有阳性对照品的一个试管、装有阴性对照品的一个试管组成，衬垫上设有容器孔，分别放置两管荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品。