[实用新型]前列腺癌遗传检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属生物技术领域，具体涉及一种前列腺癌遗传风险基因位点检测试剂盒，是通过利用荧光定量PCR，检测男性基因组DNA样本中的三个前列腺癌遗传风险基因SNP位点基因型的试剂盒。

背景技术

前列腺是男性生殖系统的一个腺体，位于膀胱下面，直肠的前面。呈胡桃大小，包围着部分尿道。其产生的液体组成精液的一部分。良性的前列腺肿大和前列腺炎产生的症状和癌症相似。前列腺癌的主要原发部位为后侧包膜下腺体，呈潜伏性缓慢生长，肿瘤很小时无任何临床表现。因此前列腺癌一般到晚期才表现出症状。前列腺癌的典型症状包括：①排尿障碍。早期常有短时的尿频及夜尿，后可出现尿流变细或尿流偏歪或尿流分叉，尿程延长、尿急、尿痛、尿意未尽感，严重时发生尿潴留。②疼痛。常见腰痛和后背痛或有坐骨神经痛，可向会阴部或直肠部放射，疼痛剧烈难忍。患者日渐衰弱，消瘦，倦怠乏力，进行性贫血，恶病质或肾功能衰竭等。

国内外大量关联研究及流行病学研究表明，前列腺癌与遗传因素关系密切，该疾病的遗传易感性研究主要集中于性激素作用途径相关基因以及常见的肿瘤易感基因。通过基因检测可以确定遗传高风险人群，并可相应制定有针对性的预防和治疗策略，对降低前列腺癌的发病和死亡都具有重要作用。

国内外大量的关联研究表明，前列腺癌的发病与雄激素受体基因(AR)上的Stu I位点、细胞色素P45017A1基因(CYP17A1)上的MspA1I位点和钙粘蛋白E基因(CDH1)上的A-160C位点这三个SNP位点基因型有很密切的关系。

研究显示，雄激素具有维持前列腺生长发育的功能，在无雄激素的环境中前列腺细胞会自发凋亡，而在正常雄激素水平的环境中前列腺细胞能持续生长分化。因此，有研究认为雄激素的过量分泌以及雄激素受体反应性过强都会造成前列腺细胞生长不受抑制，是前列腺癌发生发展的危险因素。而机体的雄激素受体的活性及表达水平与雄激素受体基因(AR)多态性有关，所以雄激素受体基因(AR)多态性也是前列腺癌的风险因素之一。Stu I位点是第1号外显子上的一个A/G多态位点(G1733A)，引起雄激素受体基因(AR)编码的蛋白第211个氨基酸发生Glu/Glu同义替换。该位点与第1号外显子上(CAG)n和(GGN)n微卫星多态连锁不平衡，大量研究表明后二者与AR基因的表达水平有关。Stu I位点的基因型有三种：AA、AG、GG，当个体携带AA风险基因型时，AR基因表达水平上调，使得AR对雄激素的敏感性增强，这相当于雄激素的水平升高，造成由AR诱导的下游基因的表达量增加，引起前列腺癌细胞的生长、分化加速，同时突变导致的细胞凋亡作用被削弱，最终易导致前列腺癌的发生和恶化，与癌细胞的转移也有一定联系。

细胞色素P45017A1基因(CYP17A1)是P450酶家族成员之一，定位于细胞内质网，在全身各组织器官都有表达，其中肝和肾表达量较多。由于CYP17A1基因参与性激素的生物合成，因此该基因多态性会直接影响性激素在体内的合成水平，从而影响其作用途径和作用效果。研究证实该基因的突变与类固醇-17α-羟化酶缺陷、17α-羟化酶/17，20-裂解酶缺陷、假两性畸形和肾上腺增生以及性激素失调的各类疾病有关。MspA1I酶切位点是5’UTR端上的一个C/T多态位点(T27C)，T、C是该位点的两个等位基因，后者可增加该基因的转录效率，提高酶活性。该多态位点的基因型有TT、TC、CC，当个体携带CC基因型时，CYP17A1的转录效率上调，合成的蛋白水平上升，相当于酶活性提高，因此雄激素的合成量也增加，促进前列腺细胞的增殖，间接增加了前列腺癌的患病风险。

钙粘蛋白E基因(CDH1)是钙粘蛋白E(E-cadherin)的编码基因，该蛋白为I型钙粘蛋白超家族的跨膜糖蛋白分子，其主要生物学作用在于介导上皮细胞的粘附，胚胎发育以及正常上皮组织中上皮细胞层的形成和维持，是细胞连接的重要分子。研究显示，钙粘蛋白E与癌症恶性程度有关。当癌组织中钙粘蛋白E表达完全缺失或仅表达而无粘附作用时，则癌细胞获得侵袭和转移能力。相比恶性程度高的癌细胞，恶性程度低的癌细胞中钙粘蛋白E表达较高。A-160C位点是5’UTR端上的一个A/C多态位点，A、C是该位点的两个等位基因，前者会降低CDH1的转录效率。该位点有三种基因型，分别为AA、AC、CC，其中AA和AC被确定为前列腺癌的风险基因型，当携带风险基因型时，影响CDH1基因正常转录，其的转录水平发生下调，表达量降低，细胞粘附作用被削弱，细胞信号转导也减弱，使得癌细胞的分化降低、侵袭性升高、转移性增强，癌症的恶性程度也升高，预后变差。