[发明专利]在氨基脲敏感性胺氧化酶存在下测定有机亚甲胺稳定性的方法

说明书

本发明提供在氨基脲(semicarbazide)敏感性胺氧化酶(SSAO)或含有SSAO活性的生物样品的存在下，测定亚甲胺(methyleneamine)、亚甲胺类化合物或含有亚甲胺部分的化合物的稳定性的方法。所公开的方法可以设计为用于高通量筛选应用的测定形式。 

发明背景 

氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)广泛地分布于组织中，尤其是血管中，说明这种酶对令循环亚甲胺失活起作用(Lyles，Prog.Brain Res.，106：293-303，1995)。许多研究人员将他们的精力集中在寻找SSAO的内源性配体和寻找这种酶的抑制剂上(Precious等人，Biochem.Pharmacol.，37：707-713，1988；Crosbie和Callingham，J.Neural Transm.Suppl.，41：427-432，1994；Elliot等人，Biochem.Pharmacol.38：1507-1515，1989；Boomsma等人，Comp.Biochem.Physiol.C Toxicol.Pharmacol.，126：69-78，2000；Yraola等人，J.Med.Chem.49：6197-6208；WO 02/066669)。另一些人则研究了SSAO的其他生理学作用。例如，SSAO，又称为血管黏着蛋白-1(VAP-1)，已显示在炎症条件下上调，并介导淋巴细胞的结合(WO98/53049)。本发明利用SSAO的酶活性来测量测试物质(test agent)在细胞和生物样品中的代谢稳定性。 

测试物质的代谢稳定性已经成为药物开发中的关键因素，因此，本发明解决了鉴定由SSAO代谢的可能测试物质的问题。化学、分子生物学以及高通量技术的进步，为药物开发程序提供了针对大量目标筛选数目庞大的化合物以鉴定前导化合物的能力。然后，这些前导化合物经过更多选择标准的检验，以鉴定出那些具有最佳“类药”(drug-like)性质(即充分 的物理化学稳定性、溶解性、安全性、功效、体内分布)的化合物。对于在开发的早期阶段鉴定和排除那些不大可能具有“类药”性质的化合物(或化合物种类)进行了显著的努力。药物在临床试验过程中失败的三个主要原因是缺乏功效、不可接受的副作用和不利的ADME(吸收、分布、代谢、排泄)性质。因此，一种化合物的最终成功不仅取决于其生物活性和效能，还取决于其ADME性质/毒性性质。因此，前导物(lead)优化程序包括选择具有期望ADME性质/毒性性质的药物的筛选，以提高新的前导化合物在临床上获得成功的可能性。药物分子的代谢转化代表了药物得以从体内清除的关键过程。鉴于SSAO在许多器官(bodily compartment)内的广泛分布，我们相信SSAO可能是一种重要的影响药物潜在的代谢倾向的酶。因此，本发明使用测定与SSAO接触(expose)的测试物质代谢稳定性的方法。由涉及生物转化的酶尤其是SSAO来测定药物或其他测试物质的代谢的方法对药物开发具有重要的含意。 

在体外研究中，化合物A(美国专利第6,977,263B号)与包括人的不同物种的血浆一起孵育。据观察，与绵羊、豚鼠、大鼠及小鼠相比，化合物A在人的血浆中更为稳定，可达一小时。此外，在人的血浆内，无论是否有氨基脲存在，在多达4小时内均未观察到化合物有显著的代谢或降解。然而，首次人体临床研究(first in man)的药物动力学数据显示，同样的化合物代谢迅速，而且其程度远高于用来自人和其他物种的血浆进行的体外试验所显示的。随后的研究证实，膜结合的SSAO对该化合物在人体内的代谢起主要作用。这些数据说明，在生理条件下，在人血浆中发现的可溶性SSAO与膜结合的SSAO相比，不具有同样水平的酶活性和/或底物特异性。因此，如化合物A所显示的，测定人的血浆稳定性并不能预测人体内SSAO的稳定性，因此在选择药剂作为临床备选药物的过程中作用有限。 

附图的简要说明 

图1显示了人SSAO的氨基酸序列(Genbank登录号Q16853；SEQ IDNO：1)。 

图2显示了人SSAO的核苷酸序列(Genbank登录号NM_00374；SEQID NO：2)。 

图3显示了化合物A的化学结构。 

发明详述 

本文引用的所有出版物均作为参考引入本文。除非另行定义，本文使用的所有技术术语和科学术语的含义均与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的意义相同。