[发明专利]软骨细胞制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及软骨细胞的制备方法，更详细而言，涉及由软骨膜细胞制备软骨细胞 的方法。

背景技术

如果人软骨先天缺损或者后天损伤或缺损时，通常不会再生。作为治疗人软骨疾 病的现有方法，有从自身的其他部位采集软骨组织移植到缺损部位的方法，但存在采集部 位和量有限的问题。为此，考虑了采集一部分自身的软骨细胞，在生物体外培养后，返回到 病患部位的方法(非专利文献1～4)，也进行了临床应用(非专利文献5、6与7)。

但是，使用软骨细胞的方法存在2个问题。即，侵袭采集部位的问题与长期维持形 态的问题。所谓第一个的侵袭采集部位的问题，是指采集用于培养软骨的软骨时，导致该部 位缺损、凹陷等畸形或功能障碍。所谓第二个的长期维持形态的问题，是由培养的软骨再生 的组织长期未被吸收，是否可以持续维持其形态的问题。

为了解决上述问题，考虑了另外寻求软骨细胞的供给源。也就是说，利用软骨细胞 以外的细胞，使其在生物体外分化为软骨细胞，返回到生物体内。上述细胞中，可以举出胚 性干细胞、间叶系干细胞、来自膝关节滑膜的细胞、脂肪细胞等(专利文献1～4)。确认了上 述细胞均分化为软骨细胞。但是，从伦理的观点考虑，胚性干细胞难以进行临床应用，并且 难以采集间叶系干细胞与来自膝关节滑膜的细胞，或者侵袭高、由脂肪细胞分化为软骨细 胞还处于研究阶段，间叶系干细胞有采集的侵袭或分化效率的问题，所以均不能应用于临 床。

目前，由生物体内外的研究能确认软骨膜形成软骨(非专利文献8～10)。上述研究 中，不分离软骨膜，直接以软骨膜块的状态进行移植，还远远不能应用于临床。

非专利文献1：vanOschGJetal，PlastReconstrSurg107：433-440(2001)

非专利文献2：Brittbergetal，TheNewEnglandJournalofMedicine331： 889-895(1994)

专利文献3：Tingetal，AnnalsofPlasticSurgery40：413-421(1998)

非专利文献4：Rodriguezetal，PlasticandReconstructiveSurgery103： 1111-1119(1999)

非专利文献5：OchiMetal，JBoneJointSurg84：571-578(2002)

非专利文献6：YanagaHetal.AesthPlastSurg28：212-221(2004)

非专利文献7：YanagaHetal.Plast&ReconstrSurg117：2019-30(2006)

非专利文献8：OveEngkvistetal.，ScandJPlastReconstSurg.1979，13； 275-280

非专利文献9：OveEngkvistetal.，ScandJPlastReconstSurg.1979，13； 371-376

非专利文献10：Duynsteeetal.，PlasrandReconstSurg.2002，110(4).1073- 1079

专利文献1：日本特开2005-511083号公报

专利文献2：日本特开2003-51875号公报

专利文献3：日本特开2005-500085号公报

专利文献4：日本特开2001-103965号公报

发明内容

本发明的目的在于提供制备对采集部位侵袭少的软骨细胞的方法。

本发明人等为了解决上述问题，开发了使用覆盖耳廓软骨或肋软骨的外侧的软骨 膜的方法。本发明人等从软骨膜分离软骨膜细胞，使其增殖，在生物体内外分化成软骨细 胞，由此成功制备了作为软骨细胞的特有基质的蛋白聚糖与II型胶原。

本发明的主旨如下所述。

(1)所述细胞，其是来自人软骨膜组织的细胞，能分化为软骨细胞。

(2)如(1)所述的细胞，其中，人软骨膜组织包括最外层与成纤维细胞层。

(3)如(1)所述的细胞，其中，人软骨膜组织包括最外层、成纤维细胞层和最内层。

(4)(1)所述的细胞的制备方法，该方法包括培养从人软骨膜组织分离的细胞的步 骤。

(5)一种组合物，其含有(1)～(3)中任一项所述的细胞。