[发明专利]间充质细胞的制造方法、牙的制造方法及牙形成用间充质细胞

说明书

技术领域

本发明涉及用于形成牙的间充质细胞的制造方法、牙的制造方法及牙形成用间充质细胞(mesenchymal cell)。

背景技术

牙是具有最外层为牙釉质、其内层为象牙质的硬组织，进而在象牙质的内侧具有产生象牙质的牙本质细胞、进一步在中心部具有牙髓的器官，有时因龋齿或牙周病等而失去。通常，认为牙损失对性命的威胁少，所以现在主要通过义齿或种植牙来修补。但是，牙的有无严重影响外观和对食物的味觉，并且从维持健康和维持高品质生活的观点来看，对开发牙的再生技术的关注越来越高。

认为牙因胎儿期的产生过程的诱导而形成，是根据多种细胞种类构筑的功能单元，与器官和脏器相同。因此，牙并不是由成体内的造血干细胞或间充质干细胞之类干细胞产生细胞种的干细胞体系产生的。由此可知，现在，仅因再生医疗进步而移入干细胞(干细胞移入疗法)不能再生牙。

为此，近年，使用分离的牙胚细胞再构筑牙胚，通过移植该再构成牙胚进行牙再生，正以这为中心进行研究。

例如，J.Dent.Res.，2002，Vol.81(10)，pp.695-700中公开了下述内容，将从牙胚分离的上皮系细胞或间充质的牙囊细胞等细胞与生物体吸收性的载体一起移植到大鼠的腹腔内，由此再生牙样组织。

作为牙胚的再生方法，例如日本特开2004-331557号公报中记载了在纤维芽细胞增殖因子等生理活性物质的存在下培养由生物体分离的牙胚细胞。另外，日本特开2004-357567号公报中提出了将从生物体中分离的牙胚细胞与能分化上述细胞的细胞中的至少一种与含有纤维蛋白的载体一起培养的方案，此处，含有纤维蛋白的载体使用牙胚的目标形状的载体，形成具有特定形态的“牙”。

美国专利申请公开第2002/0119180号公报及美国专利申请公开第2004/0219489号公报中公开了下述方法：从6个月的猪的下颚骨中，将来自形成象牙质的牙髓的间充质细胞与含有利于形成釉质的上皮系细胞的牙胚的细胞混合物接种在使由聚乙醇酸-聚乙酸共聚物构成的生物分解性聚合物固化的载体(Scaffold)中，移植到动物体内，形成牙。此处，还记载了作为载体，使用牙胚的目标形状的载体，形成具有特有形态的“牙”。

另一方面，国际公开第2005/014070号小册子中公开了用于治疗具有骨缺损或损伤的患者的牙的再生方法。根据该方法，在聚乙醇酸丝网载体上接种例如来自牙胚的间充质细胞后，将上皮系细胞与胶原一起重叠或用上皮细胞片包裹，由此形成骨。需要说明的是，国际公开第2005/014070号小册子中，为了构筑骨的形状而使用载体。

另外，国际公开第2006/129672号小册子中公开了下述技术：将来自牙胚的上皮系细胞与间充质细胞分别制成细胞集合体后，使细胞集合体密接在胶原胶内部，边保持该状态边培养，由此制造具备牙特有的细胞配置的牙。

但是，上述技术中，为了再生牙或牙胚，从生物体中获得牙胚细胞或能分化成该细胞的细胞。由此，在使用从生物体中采集的细胞的技术中，有时能获得的细胞数不充分。另外，有时细胞的获得源有限。

另外，发挥作为组织的功能时，必须将构成组织的多种细胞配置(细胞配置)在适当的相对位置，具有作为组织的方向性。

发明内容

本发明是鉴于上述情况而得到的，提供牙形成用间充质细胞的制造方法、牙的制造方法及牙形成用间充质细胞。

本发明的第一方案提供一种间充质细胞的制造方法，其是用于形成牙的间充质细胞的制造方法，该方法包括下述步骤：在分化诱导剂的存在下培养全能性干细胞，生成含有CD44阳性且CD29阳性细胞、或CD44阳性且CD106阳性细胞的分化诱导处理后的细胞集团；从所述分化诱导处理后的细胞集团中筛选CD44阳性且CD29阳性细胞、或CD44阳性且CD106阳性细胞作为牙形成用间充质细胞。

本发明的第二方案在于提供一种牙的制造方法，所述方法包括下述步骤：使实质上仅由间充质细胞与上皮系细胞中的任一种构成的第1细胞集合体、和实质上仅由任意其它一种细胞构成的第2细胞集合体在不混合的情况下密接地配置在支持载体的内部；在所述支持载体的内部培养所述第1与第2细胞集合体，其中所述间充质细胞含有上述牙形成用间充质细胞。

本发明的第三方案是提供由全能性干细胞诱导的CD44阳性且CD29阳性、或CD44阳性且CD106阳性的牙形成用间充质细胞。

根据本发明，可以提供能有效且大量制作目标牙的间充质细胞的制造方法、及有效且大量制造牙的牙的制造方法，所述牙保持有由牙釉质及象牙质得到的特有的细胞配置。

附图说明